非受体型酪氨酸激酶JAK1基因真核表达质粒的构建与真核表达

发布时间：2017-12-10 19:37

  本文关键词：非受体型酪氨酸激酶JAK1基因真核表达质粒的构建与真核表达

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【摘要】：[目的]构建非受体型酪氨酸激酶JAK1(nonreceptor tyrosine kinase-JAK1)基因真核表达质粒pcDNA4.0-HisJAK1,并转染293T细胞进行真核表达。[方法]从Hela细胞中提取总的RNA,通过RT-PCR获得JAK1基因全长c DNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA4.0-His中,构建重组质粒pcDNA4.0-His-JAK1。将真核重组表达质粒转染293T细胞,转染48 h后,在荧光显微镜下观察转染情况。免疫印迹法检测JAK1蛋白转染24 h、36 h与48 h在293T细胞中的表达。[结果]经双酶切与质粒PCR鉴定质粒克隆正确,测序鉴定序列中第2199位碱基A突变为G,为同义突变,不影响氨基酸序列。转染293T细胞48 h后,间接免疫荧光实验显示在293T细胞中检测到绿色荧光。免疫印迹检测可见大小约为133 kDa的目的蛋白。[结论]成功获得JAK1基因全长序列,并成功构建pcDNA4.0-HisJAK1真核重组表达质粒,并在真核细胞293T中获得有效表达,为进一步研究JAK1蛋白质相互作用奠定了基础。
【作者单位】： 南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所;
【基金】：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(“蛋白质相互作用均相发光分析仪器和配套试剂研究”,No.2014AA020904)资助
【分类号】：Q78
【正文快照】： JAK(Janus kinase)是一类非受体型酪氨酸激酶(PTK),JAK蛋白家族包括4个成员:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK家族是细胞因子、生长因子和干扰素的重要信号传感器[1-2],参与体内多种疾病的发生发展。主要途径通过细胞因子、生长因子等因子与受体结合,激活JAK,JAK的活化促进了下游

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1 乔燕燕;JAK1、P-STAT3和BCL-2在胃癌中的表达及意义[D];内蒙古医学院;2008年

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本文编号：1275662