人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建

发布时间：2017-12-20 23:00

  本文关键词：人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建　出处：《中国组织工程研究》2016年40期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。方法:以人静脉血基因组DNA为模板,通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pG M-T载体,测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pG L3-Basic,构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体,采用阳离子脂质体法与内对照质粒pG L3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pG L3-Basic载体与内对照质粒pG L3-TK共转染作为阴性对照组,化学发光仪检测相对荧光强度。结果与结论:(1)通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确;(2)与阴性对照组相比,该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性;(3)成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体,为研究该基因的转录调控提供了基础工具。
【作者单位】： 沈阳医学院公共卫生学院毒理教研室;
【基金】：辽宁省教育厅一般项目(L2012375)~~
【分类号】：R363
【正文快照】： 文章快速阅读: 人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建 PCR扩增目的片段切胶纯化 3’端加ApG M-T载体 构建TA克隆转化感受态,筛选阳性克隆 检测荧光素酶表达活性构建pG L3重组载体KpnⅠ和BglⅡ双酶切TA载体pG L3荧光素酶 文题释义: 多巴胺受体:多巴胺

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本文编号：1313714