NK细胞恢复及KIR基因分型在allo-HSCT中临床意义研究

发布时间：2017-12-24 08:44

  本文关键词：NK细胞恢复及KIR基因分型在allo-HSCT中临床意义研究　出处：《河北医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:研究异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)恢复情况,分析供受者NK细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)基因型与allo-HSCT后急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,a GVHD)发生率、总生存率(overall survival,OS)等临床表现的相关性。为临床预防GVHD和选择合适供者提供实验依据。方法:1选择2014年2月至2015年12月于河北医科大学第二医院血液内科进行allo-HSCT的38例患者作为研究对象。2患者的临床情况2.1 NK细胞恢复检测患者临床情况:(1)年龄:中位年龄31.5岁(3-56岁);男性17例,女性21例。(2)疾病诊断及分期:急性白血病(AL)22例,其中第1次完全缓解(CR1)期16例,≥CR2期5例,NR 1例。骨髓增生异常综合征(MDS)患者6例,其中MDS-RAEBⅠ4例,MDS-RAEBⅡ2例,IPSS-R分期:均为高危;未缓解。T淋巴母细胞淋巴瘤2例。重型再生障碍性贫血(SAA)7例。不典型慢性粒细胞白血病(a CML)1例。(3)研究截止时间(2015-12-31)。(4)供受者HLA配型:HLA10/10相和非血缘相关供者(MUD)移植2例,HLA10/10相合亲缘供者(MSD)17例,亲缘单倍体供者(haplo-HSCT)19例。(5)移植方式:非血缘供者采用外周干细胞,亲缘供者采用骨髓+外周干细胞(31/36例)/外周干细胞(5/36例)。(6)对照组:造血干细胞健康供者25例。(7)回输细胞数:MNC5.84±1.36*10^8/kg,CD34+7.03±3.62*10^6/kg(受者体重)。2.2 KIR基因研究患者临床情况:(1)年龄:中位年龄为32.5岁(3-52岁);男性14岁,女性14岁。(2)疾病诊断及分期:AL 17例,MDS 4例,T淋巴母细胞淋巴瘤1例,SAA 5例,a CML 1例。(3)供受者HLA配型:HLA10/10相和非血缘相关供者(MUD)移植2例,HLA10/10相合亲缘供者(MSD)10例,亲缘单倍体供者(haplo-HSCT)16例。(4)移植方式:非血缘供者采用外周干细胞,亲缘供者采用骨髓+外周干细胞(21/26例)/外周干细胞(5/26例)。(5)回输细胞数:MNC 6.17±1.31*10^8/kg,CD34+7.64±3.28*10^6/kg(受者体重)。2.3诊断标准:(1)疾病诊断标准参考《血液病诊断及疗效标准》[1]。(2)a GVHD的诊断及分级标准符合西雅图Fred Hutchinson肿瘤分级法[2]。(3)移植后早期病毒感染:allo-HSCT后100天内,通过检测患者外周血EBV-DNA、CMV-DNA、JCV-DNA、BKV-DNA等拷贝数大于1×10^3认为存在病毒感染。3标本采集:患者移植前及移植后满1、2、3、4.5、6、9、12个月采取外周血4ml,EDTA抗凝;对照组在干细胞动员前采血。4流式细胞术(flow cytometry,FCM;美国BD公司FACSCantoll流式细胞仪)检测各亚群免疫细胞数量变化。抗体组合:自然杀伤(NK)细胞:CD16+CD56;B细胞:CD19;T细胞:CD3、CD3+CD4、CD3+CD8。5供受者KIR基因分型及KIR遗传型检测采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法。由上海荻硕贝肯医学检验所协助检测。检测内容包括16种KIR分子类型及其基因型。6统计学处理:计量资料的组间比较应用两独立样本的t检验;计数资料的组间比较应用χ2检验。P0.05认为有显著性差异。结果:1 NK细胞恢复情况:移植后CD16+CD56+NK细胞在移植后1个月时即恢复正常水平(448.29±343.36/ul vs 329.32±174.58/ul,P=0.119)。此后不同时间点均与正常无差异。2 NK细胞恢复与a GVHD:移植后满1、2、3个月监测点,CD16+CD56+细胞在a GVHD发生组较未发生a GVHD组明显降低(1m 222.60±148.45/ul vs 581.06±358.64/ul;2m 199.70±139.48/ul vs 474.76±267.28/ul;3m143.88±80.59/ul vs 333.50±180.32/ul);P值分别为0.010、0.002、0.003。提示NK细胞减低与a GVHD发生相关。3 NK细胞恢复与疾病复发:38例患者中,6例患者移植后复发,其中4位患者NK细胞检测至移植后3个月。CD16+CD56+细胞在复发组较未复发组明显降低(1m 205.00±182.18/ul vs 555.90±337.03/ul;2m 244.00±89.61/ul vs 402.18±281.19/ul;3m 165.00±61.37/ul vs 281.11±181.86/ul);P值分别为0.040、0.039、0.043。提示NK细胞减低与移植后复发相关。4 NK细胞恢复与移植后早期病毒感染:12/38例患者发生早期病毒感染,病毒感染组患者移植后1-3个月时NK细胞数明显低于无病毒感染组患者(1m 269.42±257.35/ul vs 644.73±309.92/ul;2m 189.83±130.74/ul vs519.33±251.10/ul;3m 143.40±83.42 vs 365.50±170.84/ul),P值分别为0.002,0.000,0.001,均有统计学意义。分析显示NK细胞减低与移植后早期病毒感染相关。5 28对供受者的KIR基因分型与a GVHD发生,(1)供受者KIR基因型完全相同的占64.3%(18/28例);(2)受者KIR基因型包含供者的占17.9%(5/28例);(3)供者KIR基因型包含受者的占14.3%(4/28例);(4)供受者双方均含有对方没有的KIR基因型的占3.5%(1/28例);移植物抗宿主方向的(graft-versus-host direction,GVH方向)KIR基因相合率为82.1%(23/28例),KIR不相合率为17.9%(5/28例)。其中KIR基因型相合组a GVHD的发生率为60.9%(14/23例),KIR基因型不相合组a GVHD的发生率为0%,(P=0.020),差异有统计学意义;而供受者KIR基因相合组OS率为69.6%(16/23例),不合组OS率为80.0%(4/5例),(P=0.552),两者间差异无统计学意义。提示KIR基因不合患者a GVHD发生率减低。6 a GVHD发生与KIR遗传型28例患者中,其供者KIR遗传型为A/A型组和B/X型供者组a GVHD的发生率分别为65%(13/20例)和12.5%(1/8例);OS率分别为65%(13/20例)和87.5%(7/8例);(P值分别为0.016和0.240)。提示B/X型供者a GVHD的发生率低于A/A型。7供者活化型KIR-2DS1基因阳性时,a GVHD发生率为14.28%(1/7例),KIR-2DS1为阴性时,a GVHD发生率为61.9%(13/21例),二者比较P=0.038,差异有统计学意义;但两组间OS率71.4%(6/7)vs66.6%(14/21)无差异(P=0.327)。提示KIR-2DS1阳性供者a GVHD发生率低于KIR-2DS1阴性。结论:1 allo-HSCT后CD16+CD56+NK细胞恢复迅速,1个月可恢复至正常水平。2 allo-HSCT后发生a GVHD患者NK细胞恢复缓慢。3出现所检测病毒感染患者较未感染者NK细胞恢复时间延长。4供受者KIR基因型GVH方向不相合组a GVHD发生率低于相合组。5供者KIR分子B/X遗传型较A/A遗传型a GVHD发生率较低。6供者NK细胞活化性KIR-2DS1基因阳性时,受者a GVHD发生率低。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R457.7

【参考文献】

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1 吴功强;KIR基因型对异基因造血干细胞移植结果的影响及其机理研究[D];浙江大学;2009年

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本文编号：1327673