红斑马鱼会撑死吗_斑马鱼基因工程的研究进展_吴玉萍46
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斑马鱼基因工程的研究进展_吴玉萍46
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遗 传 学 报 Acta Genetica S inica , October 2004 , 31 ( 10):1167 ~ 1174
I SSN 0379 -4172
The Research Progress of Zebrafish Gene Engineering
W U Yu-Ping , XIONG Qian , ZHANG GuangXian , XU An-Long
( The Open Laborator y o f Mari ne Fu nctional Genomi cs of S tate High-Tech Development , Col lege of Lif e Sciences , S un Yatsen Uni ver si ty , Guangzhou 510275 , China)
Abst ract :The research progress of zebrafish gene engineering is reviewed , in including the recent explosion status of transgenic zebrafish l ines , transgeneic zebrafish in targeted screens , the development of transgenic technology in ze brafish as well as the current hotspots and future perspective of zebrafish gene engineering. By now the zebrafish gene engineering , nuclear transplantation and chromosome set mani pulation technologies have been established in China. With firm foundation of zebrafish cytogenetics and embryology , we will obtain gene engineering zebrafish with gene targeting integration and promote the advancement and development of biotechnology in applied research field in near fu ture. Key words :zebrafish;gene engineering
斑马鱼基因工程的研究进展
吴玉萍 , 熊 茜 , 张广献 , 徐安龙
( 中山大学生命科学学院 , 国家 “ 863” 计划海洋生物功能基因组开放实验室 , 广州 510275)
摘 要 :对国内外斑马鱼基因工程研究进展 , 包括最近获 得的大批转基因斑马鱼品系 、靶向筛 选的转基 因斑马鱼 、 斑马 鱼转基因技术的发展和斑马鱼基因工程的热点问 题与应 用前景进 行了综 述 。 指出 我国已建 立日趋 成熟的 斑 马鱼 转基因技术 、细胞核移植技术和染色体组操作技术 , 具有斑马鱼细胞遗传学和 胚胎学基础 , 我国 有望在不久 的 将来获得定向整合的基因工程斑马鱼 , 并推动生 物技术应用研究领域的进步和发展 。 关键词 :斑马鱼 ;基因工程 中图分类号 :Q341 文献标识码 :A 文章编号 :0379-4172( 2004) 10 -1167 -08
20 世纪 90 年代开始启动的“ 人类基因组计划” ( HGP) 重点内容之一是对模式生 物的研究 。 具备 脊椎动物分子发育生物学和人类基因组计划模式种 条件的斑马鱼 , 由于其易于进行细胞谱系分析并兼 具酵母 、 线虫 、 果蝇和小鼠式遗传的特征而日益受到 学者的关注 。 1981 年 , Streisinger[ 1] 在《Nature》 上发
表了关于斑马鱼克隆系的研究 , 随后它的基因连锁 图的构建成为突变基因克隆的开端[ 2] 。
1 斑马鱼基因工程研究概况
斑马鱼的转基因研究始于 1988 年[ 3 , 4] , 此后进
收稿日期 : 2003 -10 -17 ; 修回日期 : 2004 -02 -13 基金项目 : 国家“ 863” 计划项目( 编号 : 2002A A629010) 、国家自然科学 基金( 编号 : 30371113) 、广 东省科技计划项 目( 编号 : 2003C20303) 和珠 海 市科技计划项目( 编号 : PC200310043) 资助[ Support ed by the National “ 863” Project( No . 2002AA 629010) , Chinese N ational N atu ral Science Foundat ion ( N o. 30371113) , t he Science and Technology Project of Guangdong Province( No . 2003C20303)and t he Science and Technology Project of Zhuhai Cit y( No . PC200310043) ] 作者简介 : 吴玉萍( 1963 ) , 女 , 博士 , 副教授 , 研究方向 : 鱼类遗传学 。 E -mail : exw yp @zsu . edu . cn
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遗传学报 Acta G enetica Sinica V ol . 31 No . 10 2004
展迅速 。 目前 , 国内外已获得大批转基因斑马鱼品 系( 表 1) 。 例如 : 1992 年 , Lin 等
[ 5]
用 , 作为动物模型探讨发育 、 生长 、 繁殖等机理 , 以及 阐明控制脊椎动物的发育机制等方面均具有重要意 义 。 目前 , 斑马鱼卵母细胞体外成熟 、 配子发生和受 精的调控机制 、 胚胎干细胞的分离 、 基因克隆及基因 敲除等研究都已成为研究热点 。
把有色斑马鱼囊
胚细胞注入白化种囊胚 , 得到有色素细胞的嵌合体 , 嵌合体与白化鱼交配得到有色后代 ; 移植转 lacZ 基 因囊胚细胞也得到嵌合体 , 转基因性状可以传递给 后代 。 斑马鱼转基因技术对分析体内细胞间相互作
表 1 转基因斑马鱼品系 Table 1 Transgenic zebrafish lines
表达分类 Expression category 1 无限制 U nrestrict ed pU SV CA T RS V/ lacZ CM V/ l ucif erase dHSP/ C AT-NP TBGAL dHSP/ HPT Xenopus ef 1a/ lacZ P P P P P pSV/ hygro 转植基因 Transgene 载体 Vector P 表达模式 Expression pat tern 无表达 N ot expressed 一批阳性 Bat ch assay positi ve 无表达 N ot expressed 无表达 N ot expressed 无表达 N ot expressed 5 个 种系 自 普遍 存在 至 斑驳 的表达 Five lines range f rom ubiquit ous to patch M oM LV/ lacZ RSV/ neo Xenopus ef 1a/ GFP R P 无表达 N ot expressed 2/ 4 可检测表达 , 普遍存在 2/ 4 wit h det ectable expression , ubiquitous Carp β actin/ CA T P 不均一表达 , 限制于 轴向和轴 旁的中胚层 N onuni form expression li mi ted to axial and paraxial mesoderm Xenopus ef 1a/ lacZ Zebrafi sh β actin/ GFP Xenopus ef 1a/ GFP Carp β actin/ CA T Carp β actin/ CA T Xenopus ef 1a/ GFPnt d M edaka β act in/ GFP Zebrafi sh ef 1a/ H2B GFP R P T P P +I P P +ITR P 无表达 N ot expressed 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在 Ubiquitous 普遍存在( 定位细胞核) Ubiquitous (nuclear localizat ion) 2 神经系统 N ervous system Zebrafi sh islet 1/ GFP Zebrafi sh HuC/ GFP P P M ouse HS P/ lacZ P 7/ 8 非表达系 , 1 个种系表达 7/ 8 nonexpressi ng lines ; 1 line expressi ng 头盖运动神经元 C ranial mot or neurons 神经系统 N ervous system 3 2* 6 [ 20] 8 8 2 4 12 19 100 * [ 14] [ 15] [ 16] [ 16] [ 17] [ 18] [ 19] 83 [ 13] 7 [ 12] 16 7 [ 10] [ 11] 6 [ 9] 31 [ 8] 16 3 [ 6] [ 7] 7 [ 4] 转基因发生率( % ) Rate of transgenesis 5* 参考文献 Ref erence [ 3]
[ 21] [ 22]
WU Yu-Ping et al . : T he Research Prog ress of Zebrafish Gene Engineering
1169 续表 1
表达分类 Expression category
转植基因 Transgene G oldf ish a 1tubulin/ GFP Zebrafi sh rod opsin/ GFP Rat G AP 43/ GFP Zebrafi sh HuC/ GFP Zebrafi sh pax 2 . 1/ lacZ
载体 Vector P P P P P
表达模式 Expression pat tern 神经系统 N ervous system 视网膜杆状体光感受器 Rod photorecept ors 神经系统 N ervous system 神经系统 N ervous system M HB , 后脑 , 脊髓等 M HB , hindbrain , spi nal cord et al .
转基因发生率( % ) Rate of transgenesis 2~ 5 4* 3 100 9
参考文献 Ref erence [ 23] [ 24] [ 25] [ 19] [ 26]
Zebrafi sh AA N AT-2/ GFP 3 淋巴细胞 Lymphoid cell Zebrafi sh rag 1/ GFP
P PA C
松果腺光感受器 Pineal photoreceptor 容量最 大载 体 , 在胸 腺 肾 、嗅 觉神经元中表达 Largest const ruct expressed in thymus, kidney and olf actory neurons
3 n. a.
[ 27] [ 28]
4 上皮细胞 Epit helia 5 胰腺 Pancreas 6 肌肉 M uscle
Zebrafi sh krt 8/ GFP Zebrafi sh insulin/ GFP Zebrafi sh a-actin/ GFP Zebrafi sh a-actin/ GFP
P P P +ITR P P+ /-N LS
上皮细胞 Epit helia 胰腺 Pancreas 肌肉 M uscle 肌肉 M uscle 中间细胞和循环血液 In termediate cell mass and ci r culating blood
16 n. a. 6 28 1
[ 29] [ 30] [ 18] [ 14] [ 31]
7 血液 Blood 8 生殖细胞 G erm cells 9 脉管系统 Vasculat ure
Zebrafi sh gat a1/ GFP
Zebrafi sh vasa/ GFP Zebrafi sh f li 1/ GFP
P P
生殖细胞 G erm cells 脉管系统 、主动脉 弓 、颌 、鳍间 叶细胞 D eveloping vasculature , aortic arches , jaw , fi n mesenchyme
2 15
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