拟南芥MAP激酶基因克隆及相互作用研究

发布时间：2018-01-18 15:28

  本文关键词：拟南芥MAP激酶基因克隆及相互作用研究　出处：《兰州大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： BiFC MAPKKKs MAPKKs MAPKs 酵母双杂交 亚细胞定位

【摘要】：MAP激酶是植物细胞中多种信号通路的中心。在植物体中,MAP激酶不发生磷酸化,则处于静止状态。但当植物在射线、病原体、干旱等外界信号的刺激作用下,MAPKKK、MAPKK和MAPK顺序磷酸化,激活下游靶标基因的表达,进而调控植物的生长和发育,以及植物对环境的应激适应、抗病反应等。本研究通过Gateway体外重组技术,克隆了27个MAPKKKs,10个MAPKKs和13个MAPKs基因。通过酵母双杂交发现有21对MAPKKs和MAPKKKs之间存在相互作用。其中,MKK5和Raf23、Raf25、Raf47有很强的相互作用,和Raf27有较强相互作用,和MAPKKK9的相互作用较弱。同时,MKK7和Raf48有较强的相互作用,和Raf22、Raf41有较弱的作用。MKK8和Raf23、Raf25、Raf47有很强的相互作用,但和Raf27的相互作用较弱。Raf28和下游的MKK1/2/3/4/6/9/10都有相互作用,和MKK9/10的相互作用比较强,MAPKKK12和下游的MAPKKs蛋白没有相互作用。为了进一步确定结果的可靠性,本研究还采用BiFC技术对4对基因进行验证,结果显示Raf23、Raf47和MKK5有相互作用,而Raf22、Raf48和MKK5没有相互作用,和酵母双杂交的结果一致。为进一步阐释这些具有相互作用蛋白的功能,本研究还对以上MAP激酶分别进行了亚细胞定位分析。结果显示,这些蛋白主要定位在细胞质和细胞膜上,还有一些在细胞核中也有定位,如Raf25、Raf28、MKK3、MKK5和MKK6。它们的共定位为其相互作用提供了基础。综上所述,本研究系统阐释了MAPK信号途径中MAPKKs和上游MAPKKKs的相互作用关系,同时还对这些蛋白进行了系统的亚细胞定位研究,为后续进一步开展MAPK信号通路的研究奠定了一定的基础。
[Abstract]:MAP kinase is the center of many signaling pathways in plant cells. In plants, map kinases do not phosphorylate, but remain stationary. But when plants are in radiation, pathogens. Under the stimulation of drought and other external signals, MAPKKKK MAPKK and MAPK were sequentially phosphorylated, which activated the expression of downstream target genes and regulated the growth and development of plants. In this study, 27 MAPKKKs were cloned by Gateway recombination in vitro. Ten MAPKKs and 13 MAPKs genes. 21 pairs of MAPKKs and MAPKKKs were found to interact with each other by yeast two-hybrid. MKK5 has strong interaction with Raf25 Raf47, strong interaction with Raf27 and weak interaction with MAPKKK9. MKK7 and Raf48 have strong interaction with Raf22 Raf41. MKK8 and Raf23 Raf25 Raf47 have strong interaction. However, the interaction with Raf27 is weak. Raf28 and downstream MKK1/2/3/4/6/9/10 have strong interaction with MKK9/10. There was no interaction between MAPKKK12 and downstream MAPKKs protein. In order to further determine the reliability of the results, BiFC technique was also used to verify the four pairs of genes. The results showed that Raf23, Raf47 and MKK5 interact with each other, while Raf22, Raf48 and MKK5 have no interaction. In order to further elucidate the function of these interacting proteins, the subcellular localization analysis of the above MAP kinase was also carried out. These proteins are mainly located in the cytoplasm and cell membrane, and some also in the nucleus, such as Raf25, Raf28MKK3. MKK5 and MKK6. their co-localization provides the basis for their interaction. In this study, the interaction between MAPKKs and upstream MAPKKKs in MAPK signaling pathway was systematically explained, and the subcellular localization of these proteins was also studied. It lays a foundation for further research on MAPK signaling pathway.
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1441467