铜绿假单胞菌对白念珠菌生物活性的体外影响及对菌丝特异性基因表达的调控

发布时间：2018-02-05 05:03

本文关键词： 白念珠菌铜绿假单胞菌菌丝生物膜菌丝特异性基因　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的观察铜绿假单胞菌(PA)对白念珠菌(CA)标准株ATCC90028形态转换及生物膜的体外影响,并进一步了解部分菌丝特异性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表达情况。方法采用抑菌圈法了解50株PA对CA平板生长的抑菌作用,分别取抑菌圈明显和无抑菌圈形成的PA各3株,取各自的上清液加入促菌丝培养液中,6h后镜下观察CA形态转换情况,以LB液体培养基作为对照;采用96孔板半定量法(MTT)方法,向促菌丝培养液RPMI-1640 100ul中加入两倍原浓度的PA上清液100ml,培养24h后测定上述上清液对CA生物膜增殖的影响;采用荧光定量逆转录PCR(rt-q PCR)方法,提取白念珠菌总RNA,逆转录为c DNA,扩增目的基因,数据分析选择相对定量2-△△CT方法,了解菌丝特异性基因在不同PA上清液影响下与对照组相比变化的倍数情况。结果50株PA中有19株出现了明显的抑菌圈(19/50),边界清晰,但直径大小不等,且与PA是否产色素有关;培养6h后镜下观察只有抑菌圈明显的3株PA上清液抑制了CA向菌丝相的转换,以孢子和出芽形态生长,未见菌丝形成;其他3株与对照组相比镜下未见明显差别。抑菌圈明显的3株PA上清液能够阻碍生物膜的增殖(p0.01),无抑菌圈组的PA上清中也有一株出现阻碍生物膜增殖的作用(p0.05)。在rt-q PCR实验中,除了一株PA上清液对HWP1和ECE1基因的抑制作用无统计学差异外,其余各株PA上清液均能明显抑制菌丝特异性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表达,程度不一,不明显者约占对照组的1/2,明显者可到达1/50。结论部分PA上清液能够有效抑制体外CA的早期形态转换,且对生物膜的增值有阻碍作用;大部分PA上清液对CA菌丝特异性基因都有抑制表达作用,但程度差距较大。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of PA on the proliferation of CA biofilm in vitro . The results showed that the supernatant of PA could inhibit the proliferation of biofilm .

【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R519.3

【参考文献】