亚硝酸还原酶基因克

发布时间：2018-02-23 02:34

  本文关键词： 木糖氧化产碱菌DL- 含铜亚硝酸还原酶(Cu NiR) 克隆 表达 纯化　出处：《食品工业科技》2017年14期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因。PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 k Da,等电点(p I)4.83,命名为Cu NiR(Genbank登录号KX674378)。结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域。将Cu NiR基因构建到p ET22b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶(Cu NiR)的生化性质表征奠定理论基础。
[Abstract]:In this study, the gene containing copper nitrite reductase was cloned successfully from the genomic DNA of Achromobacter xylosoxidans DL-1 by polymerase chain reaction (PCR). The results showed that the gene was 1083 nucleotides and encoded 360 amino acids. The predicted molecular weight of the protein was about 38.924k Da. the isoelectric point was named Cu NiR(Genbank accession number KX6743780.The domain analysis showed that the coding region of the protein contained signal peptide, a copper ion binding site and a redox enzyme catalytic domain. Cu NiR gene was constructed into p ET22b vector. The expression was induced in Escherichia coli E. colianum BL21DE3. The SDS-PAGE-based detection of 12 alkyl sodium sulfate gel electrophoresis showed that the target protein was soluble and expressed. The recombinant protein was purified by nickel affinity chromatography. The specific activity was 123.82 U / mg, which laid a theoretical foundation for the characterization of the biochemical properties of copper containing nitrite reductase (Cu NiR).
【作者单位】： 大连大学生命科学与技术学院;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(31500039)
【分类号】：Q78

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本文编号：1525916