密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析

发布时间：2018-02-28 16:07

  本文关键词： 链霉菌 相容性溶质 四氢嘧啶 ectABC基因簇　出处：《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：【目的】对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析。【方法】对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶。通过Act12全基因组分析,克隆得到Act12中四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC,将其与表达载体pET-28a连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,检测工程菌株的盐耐受能力。【结果】密旋链霉菌Act12可在NaCl质量分数为0%~10.0%的条件下生长,且能够生产相关耐盐相容性溶质四氢嘧啶。当NaCl质量分数为2.5%时,密旋链霉菌Act12胞内的四氢嘧啶积累量达到最大值,为72.39mg/L。生物信息学分析结果表明,组成ectABC基因簇的3个基因ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,分别编码二氨基丁酸乙酰基转移酶、二氨基丁酸氨基转移酶和四氢嘧啶合成酶。通过克隆得到长2 408bp的ectABC基因簇,并使其成功在大肠杆菌中实现异源表达,通过Ni柱纯化得到了EctA蛋白。但含pET28a-ectABC的大肠杆菌BL21(DE3)在本试验条件下,其盐耐受能力并无明显改善。【结论】生防链霉菌Act12中存在四氢嘧啶合成基因簇ectABC,且能够在大肠杆菌中成功异源表达。
[Abstract]:[Objective] to biocontrol Streptomyces Act12 in dense spin four hydrogen pyrimidine synthesis gene cluster analysis and identification function. [method] the prevention effect is good. Salt tolerance ability of Streptomyces Act12 spin detection field, the volume fraction of 80% ethanol extract of the four intracellular hydrogen pyrimidine, respectively by TLC and HPLC the qualitative and quantitative detection of four hydrogen pyrimidine. By Act12 whole genome analysis, cloned Act12 four hydrogen pyrimidine biosynthetic gene cluster of ectABC, which is connected with the expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), salt tolerance test engineering strain. [results] the dense spin Streptomyces Act12 could grow in NaCl quality score is 0%~10.0%, and can be related to the production of salt tolerant compatible solutes four hydrogen pyrimidine. When the content of NaCl was 2.5%, four hydrogen density of Streptomyces Act12 intracellular pyrimidine spin accumulation reached the maximum value of 72.. 39mg/L. bioinformatics analysis showed that 3 genes ectA, ectABC gene cluster ectB, ectC located in the same operon, respectively encoding two amino acid acetyltransferase, two GABA aminotransferase and four hydropyrimidine synthetase. Long ectABC gene cluster of 2 408bp by cloning, and make it the successful implementation of heterologous expression in Escherichia coli, the EctA protein was purified by Ni column. But the Escherichia coli BL21 containing pET28a-ectABC (DE3) under the experimental conditions, the salt tolerance was not significantly improved. [Conclusion] biocontrol Streptomyces Act 12 four hydrogen pyrimidine biosynthesis gene cluster ectABC, and heterologous expression of success in Escherichia coli.

【作者单位】： 西北农林科技大学生命科学学院;西北农林科技大学资源环境学院;
【基金】：中央高校基本科研业务费专项(Z109021426,Z109021432) 高校博士点基金项目(Z20120204120034,Z20120204120042) 陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066)
【分类号】：S476.1

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1547991