大鼠NeuroD2基因的克

发布时间：2018-03-02 09:13

  本文关键词： NeuroD 基因克隆 生物信息学分析 pIRES-AcGFP-ND　出处：《生物技术通报》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：克隆大鼠NeuroD2基因,旨在构建p IRES2-Ac GFP1-ND2真核表达载体并检测其在小鼠MSCs中的表达。采用RTPCR技术克隆大鼠NeuroD2基因,分析该蛋白质结构、功能域、细胞定位及与其他物种同源性;构建pIRES2-AcGFP1-ND2表达载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs);采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot技术检测重组质粒在小鼠MSCs中的表达。结果表明,大鼠NeuroD2基因CDS区全长1 149 bp,共编码382个氨基酸,属于b HLH家族,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构呈现近似"螺旋-环-螺旋(HLH)"结构,主要分布在细胞核,氨基酸序列与家鼠(99%)、罗猴(98%)、人(97.7%)同源性较高;Real-time PCR结果表明转染组NeuroD2基因表达量显著高于对照组(P0.05);免疫荧光及Western blot结果显示转染组NeuroD2蛋白表达量显著高于对照组(P0.05)。成功克隆大鼠NeuroD2基因并构建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体。
[Abstract]:Rat NeuroD2 gene was cloned to construct the eukaryotic expression vector of p IRES2-Ac GFP1-ND2 and to detect its expression in mouse MSCs. The rat NeuroD2 gene was cloned by RTPCR technique. The protein structure, functional domain, cellular location and homology with other species were analyzed. PIRES2-AcGFP1-ND2 expression vector was constructed and transfected into mouse bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs). The expression of the recombinant plasmid in mouse MSCs was detected by Real-time PCR, immunofluorescence and Western blot. The results showed that the CDS region of rat NeuroD2 gene was 1 149 BP, encoding 382 amino acids. It belongs to b HLH family. The secondary structure is 伪 -helix and random crimp. The spatial structure is similar to "helix-ring-helix HLH" structure, mainly distributed in the nucleus. The results of real-time PCR showed that the expression of NeuroD2 gene in the transfected group was significantly higher than that in the control group, and the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. The results of immunofluorescence and Western blot showed that the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. Rat NeuroD2 gene was cloned successfully and the eukaryotic expression vector of pIRES2-AcGFP1-ND2 was constructed.
【作者单位】： 甘肃农业大学生命科学技术学院;兰州军区兰州总医院骨科研究所;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81470087) 全军十二五面上项目(CWS11C228)
【分类号】：Q78

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本文编号：1555897