降钙素基因相关肽对血清饥饿作用下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响

发布时间：2018-03-10 06:23

  本文选题：降钙素基因相关肽　切入点：成骨细胞　出处：《华西口腔医学杂志》2017年02期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清(血清饥饿)、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度(10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol·L~(-1))CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10~(-8) mol·L~(-1) CGRP培养不同时间(2、6、12、24、48、72 h)的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10~(-8) mol·L~(-1) CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10~(-8) mol·L~(-1) CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加(P0.01)。与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿+10~(-8) mol·L~(-1) CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿+10~(-8) mol·L~(-1) CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。
[Abstract]:Objective to study the effect of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on apoptosis and autophagy of MC3T3-E1 osteoblasts in mice under serum starvation. Methods Mouse MC3T3-E1 osteoblasts were cultured in vitro. Normal serum was detected by flow cytometry and Western blotting. Apoptosis of osteoblasts and expression of microtubule-associated protein 1 light chain 3LC3 protein in cultured osteoblasts pretreated with serum starvation 3-MA. Western blotting was used to detect normal serum and serum starvation. The expression of LC3 and P62 protein in osteoblasts cultured with different concentrations of serum starvation was detected by Western blot, and the expression of LC3 protein was detected by Western blot in osteoblasts cultured with normal serum, serum starvation and serum hungry 10 mol 路L -1) CGRP. Flow cytometry was used to detect apoptosis and MDC staining to detect autophagy. Flow cytometry was used to detect normal serum and serum starvation. The expression of LC3 鈪，

本文编号：1592141