拟南芥CBF1基因转化香蕉及其抗寒性研究

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拟南芥CBF1基因转化香蕉及其抗寒性研究

     论文目录

摘要第1-5页

Abstract第5-8页

缩略词表第8-14页

第一章 文献综述第14-42页

 1 植物的抗寒研究进展第14-28页

   ·植物低温伤害的机制第14-16页

     ·植物低温伤害的类型第14-15页

     ·低温引起植物损伤的主要原因第15-16页

   ·植物的抗寒生理生化研究第16-20页

     ·低温对光合作用的影响第16页

     ·对呼吸作用的影响第16-17页

     ·对原生质流动性的影响第17页

     ·对渗透调节物质的影响第17-19页

     ·对内源激素的影响第19-20页

   ·植物抗寒分子机理研究第20-24页

     ·低温感应器第20-21页

     ·植物的冷信号传导器第21页

     ·转录的级联反应第21-23页

     ·低温信号在抗寒和冷敏植物中的比较第23页

     ·低温胁迫与其他非生物胁迫的交叉第23-24页

   ·植物抗寒育种研究第24-28页

     ·杂交育种第24-25页

     ·诱变育种第25页

     ·分子育种第25-28页

 2 香蕉的转基因研究进展第28-34页

   ·受体材料的选择第28-29页

   ·转基因方法第29-33页

     ·粒子轰击法第30页

     ·农杆菌介导法第30-33页

     ·电击法第33页

     ·其他改进的方法第33页

   ·高效再生体系的建立第33-34页

 3 拟南芥CBF家族与植物抗冷冻性第34-39页

   ·拟南芥CBF基因家族第35-37页

     ·CBF基因的克隆第35页

     ·CBF基因的结构特征第35-36页

     ·CBF转录因子的表达调控特性第36-37页

     ·CBF基因抗逆作用机制第37页

   ·CBF转基因研究第37-39页

     ·粮食作物第37-38页

     ·经济作物和林木第38页

     ·园艺植物第38-39页

     ·草类植物第39页

 4 本研究的目的和意义第39-41页

 5 技术路线第41-42页

第二章 夫人指蕉和大蕉胚性细胞悬浮系的建立及其植株再生第42-48页

 1 材料与方法第42-44页

   ·材料第42页

   ·方法第42-44页

     ·外植体的选择与处理第42-43页

     ·愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织的选择和继代培养第43页

     ·胚性悬浮诱导第43页

     ·体细胞胚的诱导和成熟第43页

     ·胚的萌发及生根第43-44页

     ·培养条件第44页

 2 结果与分析第44-47页

   ·胚性悬浮细胞的获得第44-45页

   ·胚性悬浮细胞途径植株再生体系的建立第45-47页

 3 讨论第47页

 4 小结第47-48页

第三章 拟南芥CBF1基因对香蕉的转化第48-66页

 第一节 拟南芥CBF1基因对大蕉的转化第48-61页

  1 材料与方法第48-55页

   ·材料第48页

   ·主要培养基配方第48-49页

   ·ATCBF1基因植物表达载体的构建第49-52页

     ·ATCBF1基因的克隆第49-50页

     ·植物表达载体P1301-CBF1的构建第50-51页

     ·P1301-CBF1质粒转化农杆菌第51-52页

   ·ATCBF1基因对大蕉的转化第52页

     ·侵染和共培养第52页

     ·抗性胚的筛选第52页

     ·抗性胚萌发与植株再生第52页

   ·转基因植株的验证第52-55页

     ·GUS染色鉴定第52页

     ·PCR鉴定第52-53页

     ·RT-PCR鉴定第53-54页

     ·QRT-PCR鉴定第54-55页

   ·转基因植株的形态特征观测第55页

  2 结果与分析第55-59页

   ·A7CBF1基因的克隆第55页

   ·ATCBF1基因植物表达载体的构建第55-56页

   ·转ATCBF1基因大蕉植株的获得及GUS染色鉴定第56-57页

   ·外源基因ATCBF1的表达分析第57-58页

     ·RT-PCR的检测结果第57-58页

     ·QRT-PCR的检测结果第58页

   ·转基因大蕉的形态观测第58-59页

  3 讨论第59-61页

 第二节 拟南芥CBF1基因对夫人指蕉的转化第61-66页

  1 材料与方法第61页

  2 结果与分析第61-64页

   ·ATCBF1基因的克隆及其植物表达载体的构建第61页

   ·转基因植株的转化、筛选、再生和GUS染色第61-62页

   ·PCR检测第62-63页

   ·ATCBF1基因的表达分析第63-64页

     ·RT-PCR检测第63页

     ·定量RT-PCR检测第63-64页

   ·转基因植株的形态观测第64页

  3 讨论第64-65页

  4 小结第65-66页

第四章 转ATCBF1基因香蕉的抗寒性检测第66-81页

 第一节 转基因大蕉的抗寒性检测第66-76页

  1 材料与方法第66-70页

   ·材料第66页

   ·低温处理方法第66页

   ·抗寒生理生化指标的测定第66-70页

     ·离子渗漏率的测定第66-67页

     ·丙二醛(MDA)的测定第67页

     ·SOD酶活性测定第67-68页

     ·脯氨酸含量的测定第68-69页

     ·可溶性糖的测定第69页

     ·相对含水量的测定第69-70页

   ·数据分析第70页

  2 结果与分析第70-74页

   ·离子渗漏率的测定第70页

   ·丙二醛(MDA)含量的测定第70-71页

   ·超氧化物歧化酶(SOD)的总活性测定第71页

   ·游离脯氨酸含量测定第71-72页

   ·可容性多糖测定第72页

   ·相对含水量的测定第72-73页

   ·转基因大蕉植株的抗冷性检测第73-74页

  3 讨论第74-76页

 第二节 转基因夫人指蕉的抗寒性检测第76-81页

  1 材料与方法第76页

   ·材料第76页

   ·低温处理方法第76页

   ·抗寒生理生化指标的测定第76页

  2 结果与分析第76-80页

   ·离子渗漏率的测定第76-77页

   ·MDA的测定第77页

   ·游离脯氨酸的测定第77-78页

   ·可溶性糖的测定第78页

   ·相对含水量的测定第78-79页

   ·转基因夫人指蕉的抗冷性检测第79-80页

  3 小结第80-81页

第五章 转ATCBF1基因大蕉抗寒基因的克隆第81-96页

 1 材料与方法第81-90页

   ·试验材料第81页

   ·试验方法第81页

     ·总RNA抽提第81页

   ·抑制性差减杂交第81-90页

     ·第一链cDNA的合成第81-82页

     ·双链cDNA(DS cDNA)的合成第82-84页

     ·Ds cDNA RSAⅠ酶消化第84-85页

     ·RASⅠ酶切产物的纯化第85页

     ·接头连接第85-86页

     ·消减杂交第86-87页

     ·PCR扩增第87-89页

     ·PCR产物纯化第89页

     ·克隆转化第89-90页

     ·阳性克隆测序第90页

     ·生物信息学分析第90页

     ·基因的表达分析第90页

 2 结果与分析第90-93页

   ·总RNA的提取第90-91页

   ·Ds DNA的纯化第91页

   ·Ds cDNA合成及其RSAⅠ酶切消化第91页

   ·抑制性PCR扩增结果第91-92页

   ·阳性克隆的检测第92页

   ·序列对比结果第92-93页

   ·CLP基因的表达分析第93页

 3 讨论第93-95页

 4 小结第95-96页

结论第96-98页

论文创新点第98-99页

下一步工作设想第99-100页

参考文献第100-122页

附录第122-123页

致谢第123-124页

个人简历第124页

论文编号BS21394，，这篇论文共124页
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