鹅GnRH基因CDS区克

发布时间：2018-03-20 00:08

  本文选题：鹅　切入点：促性腺激素激素释放激素　出处：《中国兽医学报》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：本研究旨在了解鹅GnRH基因的CDS区序列及其蛋白表达情况,研究鹅GnRH蛋白的生理功能,为进一步阐明GnRH蛋白影响鹅繁殖性能的调控机制提供理论基础。采用RT-PCR方法从溆浦鹅下丘脑扩增获得GnRH基因的CDS区序列,将测序正确的DNA序列定向克隆到pET28a(+),构建表达载体pET28a-GnRH,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western blot分析。结果显示:获得的溆浦鹅GnRH基因CDS区部分序列,含有270个核苷酸,编码前体蛋白中的90个氨基酸;溆浦鹅GnRH基因CDS区在大肠杆菌中得到高效表达,GnRH基因CDS区的目的蛋白为9 900,最终测得菌体湿重为0.6g/L,纯化后得到的蛋白为20~30mg/L;清晰检测到GnRH基因表达的蛋白特异带,试验获得的抗体对原核表达的GnRH蛋白具有特异性反应;鹅GnRH基因在动物进化中高度保守,研究得到的鹅GnRH前体蛋白可为进一步研究GnRH基因的生物功能以及其对鹅就巢、产蛋等繁殖性状的影响奠定基础。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the sequence of CDS region of goose GnRH gene and its protein expression, and to study the physiological function of goose GnRH protein. In order to further elucidate the regulatory mechanism of GnRH protein on goose reproductive performance, the CDS region of GnRH gene was amplified from the hypothalamus of Xupu goose by RT-PCR method. The correct DNA sequence was cloned into pET28a (pET28a-GnRH) and transformed into BL21DE-3 E. coli to express the target protein. The results showed that the GnRH gene CDS region of Xupu goose was detected by SDS-PAGE and Western blot analysis after induced by IPTG. Contains 270 nucleotides and encodes 90 amino acids in the precursor protein; Xupu goose GnRH gene CDS region was highly expressed in Escherichia coli, the target protein of CDS region of GnRH gene was 9 900, the final WW of Xupu goose was 0.6 g / L, the purified protein was 20 ~ 30 mg / L, and the protein specific band of GnRH gene expression was clearly detected. The obtained antibody has a specific response to the prokaryotic GnRH protein, and the goose GnRH gene is highly conserved in animal evolution. The obtained goose GnRH precursor protein can be used to further study the biological function of the GnRH gene and its nests to the goose. Laying eggs and other reproductive traits laid a foundation for the impact.
【作者单位】： 西南大学;重庆畜牧科学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31572386)
【分类号】：S835

【参考文献】

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