SENEX基因在急性髓细胞白血病患者中的表达及其意义

发布时间：2018-03-23 00:09

本文选题：急性髓细胞白血病　切入点：SENEX　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景急性髓细胞白血病(acute myeloid Leukemia,AML)是成人白血病中最常见的一种类型,起源于髓系干/祖细胞突变引起的血液恶性克隆性疾病,它发病所涉及的机制非常复杂且尚未明确。尽管近年来诊疗技术发展迅速,然而仍有相当一部分患者面临复发或耐药等治疗难题,目前AML的5年总生存率(overall survival,OS)仅为30%-40%,而复发和难治患者的更是低于15%。白血病细胞很难被完全清除杀死,这也造成了难治/复发的问题出现,分析其原因,可能白血病细胞存在某种自我保护机制,促使它可以逃逸化疗药物以及免疫系统的杀伤。细胞衰老是细胞在受到内外因素的压力时,进入一种相对静止且稳定的状态。随着对衰老研究的深入,发现衰老不一定会走向不可逆的凋亡,应激性衰老(stress induced premature senescence,SIPS)是由内外压力因素刺激下提前发生的衰老,当压力解除或环境发生改变后,衰老的细胞有可能会重新复苏,进入细胞周期。而有研究发现肿瘤细胞在放化疗药物等DNA损伤的因素下也会提前出现衰老。SENEX基因是与细胞衰老相关的抗凋亡的新基因,研究表明SENEX基因可介导细胞发生SIPS具有抗凋亡和免疫抑制效应。SENEX基因的特征有利于研究临床AML的复发以及耐药的问题,因此针对SENEX基因参与AML疾病的发生和进展的研究有着重要的价值。目的本课题选择AML患者为研究对象,QRT-PCR检测SENEX基因m RNA表达水平并分析在各个阶段的AML患者(初诊、复发、缓解)和正常对照组的骨髓中的表达特点及差异,明确SENEX基因的表达是否在AML细胞中上调;并将其与AML的临床特征相结合,探讨SENEX基因的表达在AML患者中的临床意义;体外实验利用AML细胞株初步探索SENEX基因在AML中是否通过启动衰老信号通路、抑制促凋亡基因的作用来发挥保护白血病细胞的作用。方法共收集67例已确诊的AML患者的骨髓标本,其中初诊AML患者21例,骨髓缓解AML患者27例,复发的AML患者19例。同时选取12例年龄性别均相匹配的非血液肿瘤疾病的缺铁性贫血患者作为实验对照组。本实验应用实时荧光定量PCR检测SENEX基因在21例初诊AML患者(AML-ND组)、27例骨髓完全缓解的AML患者(AML-CR组)、19例骨髓复发的AML患者(AML-Relapse组)以及12例对照组的骨髓单个核细胞中的表达情况,比较该四组之间的基因表达水平的差异,并分析SENEX基因表达水平与临床特征和疗效的关联。其次在体外实验中,选用细胞毒性药物阿糖胞苷(Ara-c)刺激诱导AML细胞株NB4发生衰老,同时再联合Ara-c与Si RNA共同处理NB4细胞株作为实验组之一,对照组选用等量的PBS处理,72小时后检测并分析Ara-c组与PBS组的SENEX基因m RNA表达水平的差异,同时检测并分析Ara-c组,PBS组以及Ara-c+Si RNA组这三组细胞的凋亡水平。最后利用Si RNA沉默NB4细胞株中的SENEX基因的表达,检测该组及对照组的促凋亡基因(p53、Caspase-3)表达水平,并分析与SENEX基因的相关性。结果1.SENEX基因表达水平与AML疾病的进展有明显的相关性。AML-ND组和AML-Relapse组SENEX基因表达水平均明显高于正常对照组,同时AML-ND组SENEX基因表达水平明显高于AML-CR组。分析各亚型之间的AML中SEMEX基因的表达,以AML-M3的SENEX基因表达水平最高。AML患者SENEX基因m RNA表达水平与骨髓原始细胞比例存在正相关性。此外分析AML初诊患者的临床特征发现一次化疗缓解的患者(n=14)的SENEX基因表达显著低于一次化疗未缓解的患者(n=7),并且一次化疗未缓解的患者预后均较差。2.体外实验中,Ara-c刺激组的细胞中SENEX基因表达水平显著高于PBS对照组,且Ara-c刺激组的细胞基本处于早期凋亡阶段。而Ara-c+Si RNA组早期凋亡阶段的细胞较Ara-c刺激组显著降低。3.Si RNA-SENEX转染后,结果发现沉默SENEX基因的表达后会上调促凋亡基因(p53、Caspase-3)的表达。结论SENEX基因的异常表达与AML的发生发展以及预后密切相关。SENEX涉及AML细胞的凋亡途径,它可能通过抑制促凋亡基因的表达来拮抗白血病细胞凋亡。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

【参考文献】