大豆脂肪氧化酶基因RNAi表达载体构建及表达调控的研究.pdf

  本文关键词：大豆脂肪氧化酶基因RNAi表达载体的构建及表达调控的研究，由笔耕文化传播整理发布。

吉林农业大学博士学位论文 大豆腊肪氧化酶基因RNAi表达载体的构建及表达调控的研究 摘要 本项研究应用基因工程手段，克隆大豆脂肪氧化酶基因核心保守序列，构建高效的具 其导入大豆，抑制大豆脂肪氧化酶基因的表达，调控脂肪氧化酶的生物合成过程。以期通 过基因工程手段，改变大豆脂肪氧化酶合成途径，降低大豆脂肪氧化酶含量，提高大豆油 份含量，培育具有优良品质的大豆品种。取得如下结果： 添加一个从质粒pBll21上酶切下来的35S启动子。 2．以大豆品种“吉农18号"的基因组DNA为模板，选取大豆三种脂肪氧化酶同功酶基 因同源性最高部分，通过PCR扩增得到大豆脂肪氧化酶基因片段，将其克隆到 与已发表的基因一致。将大豆脂肪氧化酶基因片段按正向+反向的顺序插入到 pCAMBIAl301 基因的整合情况，，从PCR阳性植株中随机抽取2株进行Southernblot分析。结果表明， 转化株均有杂交带出现，外源基因以单拷贝和双拷贝的形式插入，而未经转化的植株没有 杂交信号出现，证明外源基因已整合到大豆基因组中。以转基因大豆籽粒的总RNA反转录 标18S对蛆含量相同，而内源脂肪氧化酶mRNA的含量明显降低。 3．克隆了大豆“吉农18号一自身的一段内含子，片段长度230bp，将其插入到表达载 blot 为进～步确定外源基因的整合情况，从PCR阳性植株中随机抽取3株进行Southern 分析。结果表明，转化株均有杂交带出现，外源基因以单拷贝和双拷贝的形式插入，而未 经转化的植株没有杂交信号出现，证明外源基因已整合到大豆基因组中。以转基因大豆籽 IV 吉林农业大学博士学位论文 大豆脂肪氧化酶基因RNAi表达载体的构建及表达调控的研究 和非转基因植株的内标18SRNA含量相同，而内源脂肪氧化酶mRNA的

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