花生AhGPAT9与AhLPAAT4基因的原核表达及Western Blot分析

发布时间：2018-03-30 00:37

  本文选题：花生　切入点：AhGPAT　出处：《花生学报》2017年03期

【摘要】：酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因。本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhLPAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,重组蛋白在37℃,5h诱导条件下获得高效表达。重组蛋白经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比较高的多克隆抗体。通过对重组蛋白纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示在纯化样品相应位置有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性。并采用制备的抗体对AhGPAT9与AhLPAAT4蛋白在花生不同组织及种子不同发育时期的表达进行了Western Blot分析。为深入研究AhGPAT9与AhLPAAT4基因的功能提供了科学数据。
[Abstract]:Acyltransferase gene family is the key gene of triglyceride synthesis. In this study, primer was designed based on partial sequences of AhGPAT9 and AhLPAAT4 genes cloned in the early stage, and the prokaryotic expression vector was constructed and transformed into E. coli BL21. The expression was induced by IPTG, and detected by SDS-PAGE. The recombinant protein was highly expressed under induction at 37 鈩，

本文编号：1683618