沉默pim-3基因对黑色素瘤细胞B16的抑制作用
本文选题：黑色素瘤 切入点：pim-基因 出处：《中国肿瘤生物治疗杂志》2017年10期
【摘要】：目的:观察靶向沉默原癌基因pim-3对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用。方法:用脂质体将特异性靶向沉默pim-3载体(pim-3-shRNA)和pim-3过表达载体(pim-3-MIGR1)转染到黑色素瘤细胞B16中,荧光定量PCR和Western blotting法检测pim-3 mRNA和蛋白表达的变化,Annexin V/PI染色和TUNEL染色检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blotting法检测pBad、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、caspase-3等凋亡相关分子表达的变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RTCAxCELLigence系统检测细胞迁移情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭的变化。结果:转染pim-3-sh RNA组B16细胞的pim-3mRNA及蛋白表达较对照组明显下降(P0.05),转染pim-3过表达质粒组B16细胞的pim-3 mRNA及蛋白表达较对照组显著增加(P0.05)。转染pim-3-shRNA后,B16细胞的凋亡明显增加,在此基础上共转pim-3过表达质粒后则明显逆转沉默pim-3所引起的凋亡(P0.05);进一步检测发现沉默pim-3明显下调凋亡相关分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表达,上调Bax的表达,最终引起caspase-3活性增加(P0.05)。沉默pim-3后B16细胞增殖和迁移受到抑制(P0.05),而细胞周期无明显变化。结论:靶向沉默pim-3基因能促进黑色素瘤细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和迁移,提示pim-3基因可以作为黑色素瘤基因治疗的新靶点。
[Abstract]:Aim: to observe the inhibitory effect of targeted silencing proto-oncogene pim-3 on murine melanoma cell line B16. Methods: specific targeting silencing pim-3 vector pim-3-shRNAand pim-3 overexpression vector pim-3-MIGR1 were transfected into murine melanoma cell B16 by liposome. The changes of pim-3 mRNA and protein expression were detected by fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Apoptosis was detected by Annexin V/PI staining and TUNEL staining, and the expression of apoptosis-related molecules such as pBad-2Bcl-xlBaxcaspase-3 was detected by fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Cell migration was detected by flow cytometry. The expression of pim-3mRNA and protein in B16 cells transfected with pim-3-sh RNA was significantly lower than that in control group. Pim-3 overexpression was detected by transwell invasion assay. The expression of pim-3 mRNA and protein in plasmid group B16 cells was significantly higher than that in control group. After transfection of pim-3-shRNA, apoptosis of B16 cells was significantly increased. On this basis, the overexpression plasmid of pim-3 reversed the apoptosis induced by silencing pim-3, and the expression of p-Bad-Bcl-2pcl-xl was down-regulated and the expression of Bax was upregulated by silencing pim-3, and the expression of p-Bad-Bcl-2mBcl-xl was down-regulated by silencing pim-3. The proliferation and migration of B16 cells were inhibited after pim-3 silencing, but the cell cycle did not change significantly. Conclusion: the targeted silencing of pim-3 gene can promote the apoptosis of melanoma cells and inhibit the proliferation and migration of B16 cells. The results suggest that pim-3 gene can be used as a new target for melanoma gene therapy.
【作者单位】： 山东大学药学院免疫药理和免疫治疗研究所;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81472646,No.81273220,No.91442114)~~
【分类号】：R739.5
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，本文编号：1688619
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