沼泽红假单胞菌甲氰菊酯降解基因克隆表达及特性研究

发布时间：2018-04-12 08:27

  本文选题：沼泽红假单胞菌 + 降解酶蛋白　； 参考：《湖南农业大学》2016年硕士论文

【摘要】：甲氰菊酯(Fenpropathrin)是一种人工合成的高效广谱拟除虫菊酯类仿生农药。具有药效快,击倒性强和药效持久的特点,同时在自然环境中不容易分解。随着甲氰菊酯在农业生产上的大量应用,甲氰菊酯的农药残留问题,越来越受到大家的关注。本研究利用前期分离到的降解甲氰菊酯菌株沼泽红假单胞菌PSB-S,对其降解基因进行克隆,成功克隆到三个降解基因Est3384, Est3385和Est3706,氨基酸序列系统发育树分析,三个降解酶基因分别属于酯酶超家族中的家族Ⅰ、Ⅷ和ⅡI。将这三个基因构建于pGEX-3x原核表达载体,获得了pGEX-3X-3384、pGEX-3X-3385、 pGEX-3X-3706三个重组质粒,导入E.coli Rosetta,进行降解酶蛋白的原核表达。三个降解酶蛋白的最优表达条件为35℃,IPTG浓度0.7mmol/1。诱导表达获得了三个55kDa的可溶性蛋白(目的蛋白加上GST标签)。蛋白纯化和Western blot验证结果表明,三个降解酶蛋白均为目的蛋白。三个降解酶蛋白的降解动力学和降解特性分析表明,三个降解酶蛋白最佳降解甲氰菊酯的条件为35℃,pH 7.0。三个降解酶蛋白均能降解7种不同的菊酯类农药,Est3385的最佳底物为甲氰菊酯,Est3384和Est3706的最佳底物为甲氰菊酯和氯氰菊酯,三个降解酶蛋白的降解效率均受到金属离子的抑制。本研究的原核表达的降解酶蛋白,为甲氰菊酯农药残留物的生物修复提供了新的资源,同时为构建高效降解甲氰菊酯工程菌提供了理论依据。
[Abstract]:Fenpropathrinis is a synthetic broad spectrum pyrethroid bionic pesticide.It has the characteristics of fast drug effect, strong knock down and lasting effect, and it is not easy to decompose in the natural environment at the same time.With the extensive application of fenpropathrin in agricultural production, more and more attention has been paid to the pesticide residues of fenpropathrin.In this study, three degradation genes, Est3384, Est3385 and Est3706, were cloned from PSB-Sof Rhodopa marsh, which were isolated in the early stage, and the amino acid sequence phylogenetic tree was analyzed.The three degrading enzyme genes belong to the esterase superfamily 鈪，

本文编号：1738958