脑肠肽促进小鼠异基因骨髓移植后胸腺再生的初步研究

发布时间：2018-04-13 00:24

本文选题：骨髓移植 + 免疫缺陷　；参考：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景和目的异基因造血干细胞移植后胸腺萎缩及功能缺陷导致的免疫重建延迟,是导致移植后感染死亡和疾病复发的重要原因之一。如何促进移植后受损胸腺再生及功能恢复是本领域的研究热点。近年来,脑肠肽(Ghrelin,GRL)的免疫调节作用已越来越受到人们的重视,研究报道,GRL能逆转老年鼠胸腺萎缩状态,恢复年轻化。但GRL对造血干细胞移植后胸腺作用的相关研究仍不多。本研究通过构建清髓性异基因骨髓造血干细胞移植模型,在清髓性全身照射和移植前后不同时间点输注GRL,初步探讨GRL对移植后小鼠胸腺的再生作用。研究方法:1.建立清髓性异基因骨髓移植模型,供鼠为C57BL/6小鼠(H-2Kb),受鼠为 BALB/c 小鼠(H-2Kd)。分别对全身照射(Total body irradiation,TBI)剂量(7.0Gy,7.5Gy,8.0Gy)和输注骨髓单个核细胞(BMNCs)数量(0.5x107,1.0x107,2.0x107)进行摸索。随后观察小鼠一般情况、GVHD表现、植入情况。2.为观察脑肠肽对清髓性TBI后小鼠损伤胸腺作用,120只小鼠随机分为4组,分别在TBI前7天(A1组)、TBI后1天(B1组)开始给予GRL或仅给予磷酸盐溶液(C1组),直至实验结束,D1组作为正常对照,不做任何处理。分别于TBI后1、7、14天分批处死各组小鼠,取胸腺组织计算胸腺细胞总数、HE染色及免疫荧光标记分析胸腺结构变化,流式细胞仪检测胸腺各亚群细胞亚群的比例。3.为观察 GRL 对骨髓移植(Bone marrow transplantation,BMT)后小鼠胸腺再生作用,120只小鼠随机分为4组,分别在BMT前7天(A2组)、BMT后1天(B2组)开始给予GRL或仅给予磷酸盐溶液(C2组),直至实验结束,D2组作为正常对照,不做任何处理。分别于移植后14、21、28天分批处死各组小鼠,取胸腺组织计算胸腺细胞总数、HE染色及免疫荧光标记分析胸腺结构变化,流式细胞仪检测胸腺各亚群细胞亚群的比例,用SYBR Green I法相对定量PCR检测外周血sjTREC水平。结果:1.接受7.5GyTBI小鼠全部于30天内死亡,且死亡前检测白细胞数量均小于0.5×109/L,为造血衰竭状态。本实验选用7.5Gy作为清髓性预处理方案。输注0.5x107,1.0x107,2.0x107个BMNCs组小鼠均能长期生存,但骨髓细胞植入分析结果显示,0.5x107个,1.Ox107个BMNCs小鼠为混合植入,输注2.0x107个BMNCs小鼠为完全植入。2.GRL对TBI后小鼠胸腺作用:(1)胸腺结构变化:GRL治疗的小鼠胸腺上皮细胞变性坏死明显减轻,在TBI后1天,给予GRL保护的A1组小鼠胸腺结构仍保持正常皮髓交界,而C1组已出现明显萎缩及细胞凋亡。(2)胸腺内T细胞变化:与C1组相比,GRL治疗胸腺各T淋巴细胞亚群失衡程度明显减轻,且各组T淋巴细胞亚群绝对数较高。在移植前给予GRL的A1组尤为明显,在TBI 后 14 天,A1 组及 C1 组 CD4-CD8-、CD4+CD8+、CD4+、CD8+T 细胞绝对数分别为(5.08±0.48)x106vs(2.86±0.57)x106,(P0.05)、(3.62±0.69)x106vs(1.38±0.89)x106,(P0.05)、(0.65±0.08)x106vs(0.22±0.09)x106,(P0.05)、(0.55±0.30)x106vs(0.24±0.09)x106,(P0.05)。3.GRL对BMT后小鼠胸腺作用:(1)胸腺结构变化:与C2组相比,GRL治疗的小鼠胸腺结构恢复迅速,胸腺细胞凋亡较少,在移植后28天,A2组小鼠结构已基本恢复正常,且代表胸腺基质祖细胞的K5+K8+细胞明显较C2组增多。(2)胸腺内T细胞变化:GRL治疗小鼠胸腺各T淋巴细胞亚群失衡程度较C2组明显较轻,未成熟双阴细胞比例相对减少,双阳细胞比例明显增高,且明显提高胸腺内发育成熟的CD4+细胞比例,但对CD8+细胞比例无明显影响。移植后28天,A2及B2组CD4+绝对数分别为(9.51±1.59)x106及(6.96±1.26)x106,均明显高于C2组(4.90±1.80)x106(P0.05)。移植后21,28天A2组外周血TREC水平均明显高于C2组(P0.05)。结论:GRL能在一定程度上保护小鼠胸腺免受移植前预处理损伤,增强胸腺对移植前预处理损伤抵抗,促进损伤胸腺结构的修复及胸腺细胞增殖并且能促进未成熟T细胞从双阴性向双阳性细胞分化,促进向胸腺细胞向成熟CD4+T细胞分化,增强胸腺输出功能,加快中枢免疫重建。
[Abstract]:In recent years , the effects of GRL on thymus regeneration of mice after transplantation were studied . ( 2 ) The percentage of T lymphocyte subsets in thymus was significantly higher than that of C2 group ( 5.08 卤 0.48 ) x106 vs ( 6.96 卤 1.26 ) x106 , ( P 0.05 ) , ( 3.62 卤 0.69 ) x106 , ( P0.05 ) , ( 3.62 卤 0.69 ) x106 vs ( 4.90 卤 1.80 ) x106 ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R457.7

【参考文献】