短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX超氧化物歧化酶基因的克隆及原核表达

发布时间：2018-04-16 01:11

  本文选题：短短芽胞杆菌 + 超氧化物歧化酶　； 参考：《热带作物学报》2017年08期

【摘要】：短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX具有抑菌、抗褐变和保鲜功能。以短短芽胞杆菌菌株FJAT-0809-GLX总DNA为模板,采用PCR扩增超氧化物歧化酶(Supseroxide dismutase,SOD)基因,将该片段纯化回收后与p MD18-T连接并转入大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,进行序列测定,结果显示SOD基因序列长度为609 bp(Gen Bank登录号:KM255665),编码202个氨基酸残基。将SOD基因片段与同样酶切的表达载体p ET-28a连接,构建重组表达载体p ET-28a-SOD,转入大肠杆菌BL-21,采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)进行诱导表达。SDS-PAGE结果表明,在菌体中存在约25 ku的蛋白表达产物,与该基因ORF预期大小接近。以上结果为进一步研究该酶的生理生化特性奠定了基础。
[Abstract]:Short bacillus FJAT-0809-GLX has the function of inhibiting bacteria, resisting browning and keeping fresh.The superoxide dismutase dismutase (SOD) gene was amplified by PCR using the total DNA of Bacillus FJAT-0809-GLX strain as template. The fragment was purified and recovered and ligated with p MD18-T and transferred into Escherichia coli coli)DH5 伪, and sequenced.The results showed that the length of SOD gene was 609 bp(Gen Bank accession number: KM255665, encoding 202 amino acid residues.The recombinant expression vector pET-28a-SOD was constructed by ligating the SOD gene fragment with the same enzyme digested expression vector p ET-28a. The recombinant expression vector pET-28a-SOD was transformed into E. coli BL-21 and induced by Isopropyl- 尾 -D-thiogalactopyranoside side SOD. The results showed that the expression of pET-28a-SOD was induced by Isopropyl- 尾 -thiogalactopyranoside SOD.There were about 25 ku protein expression products in the cell, which was close to the expected size of the ORF of the gene.These results lay a foundation for the further study of the physiological and biochemical characteristics of the enzyme.
【作者单位】： 福建省农业科学院农业生物资源研究所;
【基金】：福建省自然基金项目(No.2014J06012) 农业部公益性行业(农业)科研专项(No.201303094) 福建省农业科学院青年英才计划项目(No.YC2015-7)
【分类号】：Q78;Q936

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本文编号：1756630