热带假丝酵母ctfat1p基因在吸收脂肪族化合物中的功能研究

发布时间：2018-04-18 21:09

  本文选题：ctfatp基因 + 热带假丝酵母　； 参考：《中国酿造》2017年03期

【摘要】：以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因为研究对象,利用重叠PCR将ctfat1p基因内约500 bp片段与G418抗性基因(kan~r)相连接,经末端单酶切后电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将抗性基因kan~r插入至ctfat1p基因内部,实现目的基因的敲除,并通过发酵实验分析Ctfat1p在热带假丝酵母脂肪酸跨膜转运过程中的功能。结果表明,经过G418抗性筛选和基因组PCR鉴定,成功获得ctfat1p基因缺失菌株C.tropicalis 1798△ctfat1p;分析发现ctfat1p基因敲除对C.tropicalis 1798以油脂为底物培养12h后重组菌OD_(600nm)值仅为野生型菌株的47.9%,表明ctfat1p基因敲除后影响C.tropicalis 1798对油脂吸收利用。通过基因敲除手段构建ctfat1p基因缺失菌株,可以减弱细胞对长链脂肪酸的摄取,验证了ctfat1p基因为热带假丝酵母油脂吸收和利用的关键基因。
[Abstract]:The ctfat1p gene in Candida tropicalis)1798 of Candida tropicalis was used as the study object. About 500bp fragment of ctfat1p gene was linked with G418 resistance gene by overlapping PCR. The gene was electrotransformed into C.tropicalis 1798 receptive cells by endonuclease digestion.The resistance gene kan~r was inserted into the ctfat1p gene to realize the knockout of the target gene and the function of Ctfat1p in the transmembrane transport of fatty acids from Candida tropicalis was analyzed by fermentation experiments.The results showed that, after G418 resistance screening and genomic PCR identification,Ctfat1p gene deletion strain C.tropicalis 1798 ctfat1 pwas successfully obtained, and it was found that ctfat1p gene knockout was only 47.9% of that of wild-type strain, which indicated that ctfat1p gene knockout affected C.tropicalis 1798 oil absorption and utilization of C.tropicalis 1798.Construction of ctfat1p gene deletion strain by gene knockout method can reduce the uptake of long chain fatty acids in cells and verify the key gene of ctfat1p gene because of the absorption and utilization of Candida tropicalis oil.
【作者单位】： 齐鲁工业大学生物工程学院山东省微生物工程重点实验室;
【基金】：山东省自主创新及成果转化专项(No.201422CX02602)
【分类号】：Q93;Q78

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本文编号：1770059