转基因IgA肾病小鼠模型的建立与鉴定

发布时间：2018-04-20 01:27

  本文选题：IgA肾病 + 转基因　； 参考：《上海交通大学学报(医学版)》2016年01期

【摘要】：目的利用转基因方法构建一种新的自发性IgA肾病小鼠模型,模拟人体IgA1分子铰链区结构的改变在IgA肾病发病过程中的作用。方法利用转基因方法将野生型(转基因A组)及糖基化位点突变(转基因B组)的人IgA1铰链区序列转入C57BL/6J小鼠体内,置换小鼠原有的铰链区序列。依据遗传学规则进行繁殖,所有小鼠均经过PCR检测筛选出基因型阳性。阳性亲代鼠于24周龄,阳性F1代小鼠于8周龄采集尿样进行性状观察、尿沉渣镜检和尿蛋白/肌酐检测,取肾脏组织进行IgA免疫荧光染色和H-E染色以评估IgA沉积情况和肾脏组织学变化;心脏采血分离血清,检测IgA、IgG水平。结果转基因A组和B组分别得到阳性亲代鼠3只和8只,分别获得阳性F1代小鼠17只和52只。2个转基因组的阳性亲代鼠和F1代小鼠肾脏IgA免疫荧光染色显示,IgA在肾小球系膜区沉积;H-E染色显示肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,间质有炎症细胞浸润;新鲜尿沉渣镜检均未见红细胞。尿蛋白/肌酐、血清IgA和IgG水平均显著高于同周龄野生型小鼠。结论采用转入人IgA1铰链区的方法可以构建出IgA肾病小鼠模型,IgA1铰链区结构的改变在IgA肾病发生中具有重要的作用。
[Abstract]:Objective to construct a new mouse model of spontaneous IgA nephropathy by transgenic method, and to simulate the role of human IgA1 molecular hinge structure in the pathogenesis of IgA nephropathy. Methods the human IgA1 hinge region sequence of wild type (transgenic group A) and glycosylation site mutation (transgenic group B) were transferred into C57BL/6J mice by transgenic method, and the original hinge region sequence of mice was replaced. According to genetic rules, all mice were screened for genotype positive by PCR test. Urine samples were collected at 8 weeks of age, urine sediment and urine protein / creatinine were detected by microscopic examination and urine protein / creatinine detection. The renal tissues were collected for IgA immunofluorescence staining and H-E staining to evaluate the deposition of IgA and renal histological changes, and the serum samples were collected from the heart to detect the level of IgA IgA. Results 3 and 8 positive parent mice were obtained in transgenic group A and B, respectively. 17 and 52 positive F1 generation mice were obtained respectively. The IgA immunofluorescence staining in the kidneys of the positive parent mice and F1 generation mice showed that the glomerular Mesangial cells proliferated and the Mesangial matrix increased in the glomerular Mesangial region. Interstitial inflammatory cells infiltrated, and no red blood cells were found in fresh urine sediment. Urinary protein / creatinine, serum IgA and IgG levels were significantly higher than those of wild-type mice of the same age. Conclusion the transformation of IgA1 A1 hinge region into human IgA1 hinge region can be used to construct the mouse model of IgA nephropathy. The change of the structure of IgA A1 hinge region may play an important role in the pathogenesis of IgA nephropathy.
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属新华医院肾脏科;
【基金】：上海市科学技术委员会基金(12140903002) 上海市卫生和计划生育委员会科研课题(20144Y0145)~~
【分类号】：R692.31;R-332

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本文编号：1775636