转舞毒蛾LdCYP6AN15v1基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应

发布时间：2018-05-01 08:00

本文选题：舞毒蛾 + 转基因果蝇　；参考：《林业科学》2017年06期

【摘要】：【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用传统酶切连接的方法构建转CYP6AN15v1基因果蝇载体,通过转基因技术获得表达Ld CYP6AN15v1果蝇品系(命名为att P40CYP6AN15v1)。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺(7.17mg·L~(-1))处理对转基因和非转基因果蝇品系细胞色素P450活性的影响,并采用qRT-PCR法测定其对CYP6AN15v1基因表达的影响。【结果】从舞毒蛾无参照转录本文库中克隆获得CYP6AN15v1全长基因,编码512个氨基酸,蛋白分子质量为59.02 k Da;系统进化树分析表明CYP6AN15v1与甜菜夜蛾和棉铃虫关系较近。以DNA和c DNA为模板,att P40CYP6AN15v1果蝇品系均检测到1 539 bp目的基因,表明Ld CYP6AN15v1基因成功整合到果蝇基因组。与非转基因att P40果蝇品系相比,转基因att P40CYP6AN15v1果蝇品系对氯虫苯甲酰胺的敏感性显著降低,致死中浓度LC50为非转基因果蝇的2.92倍;低剂量(7.17 mg·L~(-1))氯虫苯甲酰胺胁迫下,舞毒蛾细胞色素P450酶活性和CYP6AN15v1基因的诱导作用呈现时间效应,att P40CYP6AN15v1果蝇品系P450活性为非转基因果蝇的1.09~1.93倍,主要表现为诱导效应;att P40CYP6AN15v1果蝇品系的CYP6AN15v1基因mRNA表达量呈诱导激活,其表达量为非转基因的44.54~137.80倍。【结论】利用转基因技术成功构建了转Ld CYP6AN15v1果蝇品系att P40CYP6AN15v1;氯虫苯甲酰胺可能通过诱导Ld CYP6AN15v1基因mRNA的上调表达而增强黑腹果蝇P450酶活性,从而参与对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。
[Abstract]:[objective] Cytochrome P450 is one of the most important insect pests in forestry. Cytochrome P450 is the key enzyme system involved in the metabolism of exogenous compounds, and the detoxification function of P450 family gene CYP6AN15v1 on the metabolism of insecticides was studied. [methods] the full-length c DNA of Ld CYP6AN15v1 gene was obtained by RT-PCR method. The transgenic Drosophila vector of CYP6AN15v1 gene was constructed by traditional restriction endonuclease ligation method. The expression of Ld CYP6AN15v1 Drosophila strain (named att P40CYP6AN15v1) was obtained by transgenic technique. The effects of low dose chlorfenzoate (7.17mg / L) treatment on cytochrome P450 activity in transgenic and non-transgenic Drosophila strains were studied by spectrophotometer. The effect of CYP6AN15v1 on the expression of CYP6AN15v1 gene was determined by qRT-PCR method. [results] the full-length CYP6AN15v1 gene was cloned from the library of non-reference transcripts of Hymenoptera moths and encoded 512 amino acids. The molecular weight of protein was 59.02 K Da.The phylogenetic tree analysis showed that CYP6AN15v1 had close relationship with Spodoptera exigua and Helicoverpa armigera. Using DNA and c DNA as templates, 1 539bp target gene was detected in Drosophila melanogaster strains, indicating that Ld CYP6AN15v1 gene was successfully integrated into the genome of Drosophila melanogaster. Compared with non-transgenic att P40 strain, the sensitivity of transgenic att P40CYP6AN15v1 Drosophila strain to chlorobenzamide was significantly decreased, the median lethal concentration of LC50 was 2.92 times of that of non-transgenic Drosophila melanogaster, and the low dose of LC50 was 7.17 mg / L ~ (-1) under benzoamide stress. The activity of cytochrome P450 enzyme and the induction of CYP6AN15v1 gene showed a time effect of 1.09 times of that of non-transgenic Drosophila melanogaster strain P450, which mainly showed that the expression of CYP6AN15v1 gene mRNA was induced and activated. [conclusion] transgenic fruit fly strain att P40CYP6AN15v1 was successfully constructed by transgenic technique, and chlorfenzoamide may enhance the P450 activity of Drosophila melanogaster by inducing the up-regulation of mRNA expression of Ld CYP6AN15v1 gene. Thus participate in the detoxification of p-chlorfenzoamide.
【作者单位】：东北林业大学林学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31570642) 黑龙江省自然科学基金项目(C201409) 东北林业大学本科生创新项目(201510225183)
【分类号】：S763.42

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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