类表皮生长因子域7基因shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定

发布时间：2018-05-11 02:37

  本文选题：类表皮生长因子域 + RNA干扰　； 参考：《中国临床药理学杂志》2017年19期

【摘要】：目的用基因重组技术构建LV3-人类EGFL7基因的小发卡RNA(LV3-h EGFL7-shRNA)慢病毒表达载体。方法设计靶向h EGFL7-shRNA序列,建立LV3-h EGFL7-shRNA,在慢病毒载体p GLV3/H1/GFP+Puro中放置h EGFL7-shRNA基因片段,DNA测序以及酶切的方式进行检测h EGFL7片段,转染293T细胞后对上清液进行浓缩,最后在对病毒滴度进行检测。结果 EGFL7-shRNA核苷酸链有正确的插入顺序,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×108TU·m L~(-1)。结论 h EGFL7-shRNA慢病毒表达载体构建成功,鉴定可满足试验需求。
[Abstract]:Objective to construct the lentivirus expression vector of LV3-human EGFL7 RNA(LV3-h EGFL7-shRNA by gene recombination technique. Methods LV3-h EGFL7-shRNAs were designed, LV3-h EGFL7-shRNAs were established. H EGFL7-shRNA gene fragments were sequenced and digested to detect h EGFL7 fragments in lentivirus vector p GLV3/H1/GFP Puro. The supernatants were transfected into 293T cells and concentrated in the supernatant. Finally, the virus titer was detected. Results the EGFL7-shRNA nucleotide chain had the correct insertion sequence, and the titer of the virus suspension produced by the packaging lentivirus was 2 脳 108TU m / L ~ (-1). Conclusion the h EGFL7-shRNA lentivirus expression vector was successfully constructed and the identification can meet the needs of the test.
【作者单位】： 海口市人民医院神经内科;海南省农垦总医院神经外科;
【基金】：海南省自然科学基金资助项目(814375) 海南省卫生厅基金资助项目(琼卫2010-31)
【分类号】：R741

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本文编号：1872062