慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用

发布时间：2018-05-12 13:00

本文选题：乙酰肝素酶 + 乳腺癌　；参考：《中国老年学杂志》2017年13期

【摘要】：目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。
[Abstract]:Objective to construct a short hairpin RNA-shRNA-lentivirus vector and transfect it into breast cancer MDA-MB-231 cells to investigate the silencing effect of lentivirus-carrying shRNA on the expression of heparinase (HPA) gene in breast cancer cells. Methods five pairs of shRNA recombinant lentivirus vectors were constructed and transfected into breast cancer MDA-MB-231 cells by using the RNA interference RNAi sequence design principle. The effect of HPA-shRNA on HPA protein expression in MDA-MB-231 cells was detected by Western blot. The growth inhibition of HPA-shRNA on breast cancer cells and the killing effect of 5-Fu on breast cancer cells were detected by CCK-8. The effect of HPA-shRNA on the invasion ability of breast cancer cells was detected by transwell assay. Furthermore, the effect of HPA-shRNA on the cell cycle of breast cancer was detected by flow cytometry. Mouse metastatic tumor model was established to detect the inhibitory effect of HPA-shRNA on the growth of breast cancer cells in vivo. Results HPA-shRNA recombinant lentivirus vector was successfully constructed. In vitro, HPA-shRNA3 group (HPA-shRNA1 group) effectively silenced the expression of HPA in human breast cancer MDA-MB-231 cells. HPA-shRNA1 significantly inhibited the growth of breast cancer cells. HPA-shRNA1 could increase the sensitivity of breast cancer cells to 5-Fu. In addition, HPA-shRNA1 can induce cell cycle arrest in S phase of breast cancer cells. The relative expression of HPA gene mRNA in the HPA-shRNA1 group was significantly lower than that in the negative control group (P0.05HPA-shRNA1). HPA-shRNA1 could silence the expression of HPA mRNA in breast cancer xenografts. HPA-shRNA1 also inhibited the growth of breast cancer cells in vivo. Conclusion HPA-shRNA recombinant lentivirus vector can effectively inhibit the expression of HPA gene in breast cancer and play a good anti-tumor effect.
【作者单位】：承德医学院附属医院外一科;承德医学院附属医院小儿内科;
【基金】：承德市科学技术研究与发展计划项目(No.20151029)
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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