拟南芥氰丙氨酸合酶CYS-C1基因扩增及多克隆抗体制备

发布时间：2018-05-16 16:30

  本文选题：拟南芥 + 氰丙氨酸合酶　； 参考：《江苏农业学报》2017年06期

【摘要】：已有研究结果表明,植物自身能产生剧毒的氰化物(如HCN),而氰丙氨酸合酶(Cyanoalanine synthase,CAS)是植物解氰作用的关键酶,在植物生长、发育及逆境胁迫响应过程中起重要作用。本研究通过克隆拟南芥CAS合酶关键基因CYS-C1全长后,构建原核表达载体p EASY-CYS-C1并导入大肠杆菌E.coli受体细胞中进行表达。结果表明,在大肠杆菌E.coli细胞中成功诱导出可溶性的CYS-C1蛋白,其中IPTG最佳诱导时间为4 h,最佳诱导浓度为0.2 mmol/L。原核表达的CYS-C1蛋白经Ni柱纯化并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明,CYS-C1蛋白多克隆抗体的特异性较好。本试验结果对于进一步开展CAS合酶的功能研究奠定了基础。
[Abstract]:It has been shown that plants can produce highly toxic cyanide, such as HCNN, and cyanoalanine synthase (cyanoalanine synthase) is the key enzyme of cyanolysis, which plays an important role in plant growth, development and stress response. After cloning the full length of Arabidopsis CAS synthase key gene CYS-C1, a prokaryotic expression vector, p EASY-CYS-C1, was constructed and expressed in Escherichia coli E.coli receptor cells. The results showed that soluble CYS-C1 protein was successfully induced in Escherichia coli E.coli cells. The optimal induction time and concentration of IPTG were 4 h and 0.2 mmol / L, respectively. CYS-C1 protein expressed in prokaryotic cells was purified by Ni column and immunized with New Zealand white rabbit to prepare polyclonal antibody. The results showed that the specificity of polyclonal antibody against CYS-C1 protein was better. The results laid a foundation for further research on the function of CAS synthase.
【作者单位】： 武汉生物工程学院生命科学与技术学院;武汉生物工程学院应用生物技术研究中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(31400242)
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1897592