布鲁氏菌BMEII0988基因的克

发布时间：2018-05-20 20:02

  本文选题：布鲁氏菌 + BMEII基因　； 参考：《生物技术》2017年02期

【摘要】：[目的]检测布鲁氏菌BMEII0988基因的原核表达情况并对其免疫原性进行分析。[方法]以热灭活的布鲁氏菌16M标准株为模板,根据Gen Bank中公布的羊种布鲁氏菌16M的BMEII0988基因序列分别设计引物,用PCR方法扩增BMEII0988基因的编码序列,连接到T载体测序,将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体p ET-32a上,转化入大肠杆菌DE3感受态细胞中诱导表达,将获得的目标蛋白用AKTAxpress智能多维纯化系统进行纯化,并用Western Blot分析其反应原性。[结果]BMEII0988基因长度为1 131 bp,编码377个氨基酸,SDS-PAGE表明BMEII 0988融合蛋白在大约66 k Da处出现条带,纯化后条带单一,BMEII 0988蛋白(NCBI标准序列号:WP_002966326.1)具有较好的反应原性。[结论]该研究为下一步建立相应蛋白标记的诊断方法和疫苗的研发奠定了基础。
[Abstract]:[objective] to detect the prokaryotic expression of brucella BMEII0988 gene and analyze its immunogenicity. [methods] the 16M standard strain of brucella was used as template, primers were designed according to the 16M BMEII0988 gene sequence published in Gen Bank, the coding sequence of BMEII0988 gene was amplified by PCR method, and ligated to T vector sequencing. The correctly sequenced gene sequence was cloned into prokaryotic expression vector p ET-32a and transformed into Escherichia coli DE3 receptive cells to induce expression. The target protein was purified by AKTAxpress intelligent multidimensional purification system and its reactivity was analyzed by Western Blot. [results] the length of BMEII0988 gene was 1 131 BP, encoding 377 amino acids. SDS-PAGE showed that the fusion protein of BMEII 0988 appeared bands at about 66kDa. After purification, the single sequence number of BMEII 0988 protein was: WP002966326.1). [conclusion] this study lays a foundation for the next step to establish the diagnostic method of the corresponding protein marker and the development of vaccine.
【作者单位】： 铜仁学院大健康学院;铜仁学院农林工程与规划学院(铜仁市文化科技产业创新研究中心);浙江大学动物科技学院;石河子大学动物科技学院;商丘师范学院生物与食品学院;邢台市第二医院肝病二科;石河子大学医学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(“E2泛素结合酶关键分子调控胞内布鲁氏菌存活的分子机制研究”,No.31502067;“布鲁氏菌转录因子GntR调控细胞凋亡的分子机制研究”,No.31602080) 铜仁学院博士科研启动基金项目(“布鲁氏菌感染巨噬细胞后PI3K/Akt通路调控凋亡的分子机制研究”,No.trxy DH1504) 贵州省教育厅自然科学研究重点项目(“Toll样受体信号通路在绵羊肺炎支原体感染宿主细胞中的作用机理研究”,黔教合KY字(2015)411号) 贵州省科技合作计划项目(“TLR2/6-NF-κB信号通路在丝状支原体山羊亚种感染中的机制研究”,黔科合LH字[2015]7238);贵州省科技合作计划项目(“JAK/STAT信号通路在单核细胞增生李斯特菌侵染脑微血管内皮细胞中的作用机制研究”,黔科合LH字[2015]7236号)
【分类号】：R378.5;S852.61
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本文编号：1916034