单增李斯特菌Hly基因的原核表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2018-05-24 01:10

  本文选题：单增李斯特菌 + LLO蛋白　； 参考：《江西农业大学学报》2017年01期

【摘要】：为获得单增李斯特菌溶血素(Listeriolysiono,LLO)蛋白及其多克隆抗体。根据单增李斯特菌溶血素蛋白的基因Hly序列设计了一对特异性引物,扩增出Hly基因,克隆入原核表达载体p ET-32a,并转化于大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的作用下重组LLO蛋白成功表达。SDS-PAGE结果表明重组蛋白分子量约为69.3 ku,且主要以包涵体形式表达LLO蛋白。将重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗LLO抗体。Western-blot检测到一条约69.3 ku的特异性条带,表明该抗体具有较强的特异性。单增李斯特菌溶血素基因Hly在大肠杆菌中已成功表达,且制备的多克隆抗体可用于LLO蛋白的检测。
[Abstract]:To obtain Listeria monocytogenes hemolysin low) protein and its polyclonal antibody. According to the Hly sequence of the hemolysin protein of Listeria monocytogenes, a pair of specific primers were designed, the Hly gene was amplified, cloned into prokaryotic expression vector pET-32a, and transformed into Escherichia coli BL21. The recombinant LLO protein was successfully expressed by the inducer IPTG. SDS-PAGE showed that the molecular weight of the recombinant protein was about 69.3ku. and the LLO protein was mainly expressed in the form of inclusion body. The recombinant protein was purified and immunized to New Zealand white rabbits, and a specific band of 69.3 ku was detected by Western blot. The results showed that the antibody had strong specificity. The hemolysin gene Hly of Listeria monocytogenes has been successfully expressed in Escherichia coli and the polyclonal antibody can be used for the detection of LLO protein.
【作者单位】： 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31302096) 江苏省自然科学基金(BK2011536) 江苏省“333人才工程” 江苏省“六大人才高峰”项目~~
【分类号】：R378

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1927107