鲍氏志贺菌临床株的毒力基因检测和分子分型

发布时间：2018-05-29 06:34

  本文选题：志贺菌属 + 鲍氏　； 参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:研究2015年夏季门诊收集到的9株鲍氏志贺菌,对其菌株采用生化鉴定、药敏鉴定、PCR扩增毒力基因和PFGE技术了解鲍氏志贺菌临床分离株毒力基因分布、耐药性、分子分型及菌株间流行病学相关性。方法:1、从2015年夏季天津某综合三甲医院腹泻病门诊就诊患者粪便中分离培养志贺菌,经常规生化鉴定和血清学分型证实。2、药物敏感性分析:采用K-B纸片扩散法进行抗生素药物敏感实验,共包含13种药物:氨苄西林(AMP)、头孢他啶(CTZ)、链霉素(STR)、庆大霉素(GM)、复方新诺明(SMZco)、头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CTR)、四环素(TE)、诺氟沙星(NOR)、左氧氟沙星(LVP)、阿米卡星(AMK)、头孢哌酮-舒巴坦(CSL)和亚胺培南(IMP)。3、毒力基因检测:采用聚合酶链反应PCR技术扩增染色体以及质粒上携带的的毒力基因:ipa H,ial,,set1A,set1B,sen,vir A,ics A,sat,pic,sep A,Sig A.4、采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)技术分析9株鲍氏志贺菌之间的亲缘关系。结果:1、血清分型及生化鉴定结果9株鲍氏志贺菌分为3个亚型:Ⅰ型1株(C2),Ⅱ型3株(C10、C12、C13),Ⅳ型5株(C4、C8、C14、C15、C16)。2、药敏试验结果:9株鲍氏志贺菌均为多重耐药菌。其中,AMP的耐药率为9/9,TE、NOR、LVP的耐药率为6/9,CTX、CTR的耐药率为5/9,STR、GM、SMZco的耐药率为4/9,CTZ的耐药率1/9,9株鲍氏志贺菌全部对AMK、CSL和IMP敏感。3、毒力基因检测结果9株鲍氏志贺菌中,ipaH的检出率为9/9,pic的检出率为4/9(C8、C14、C15、C16),sep A的检出率为5/9(C8、C12、C14、C15、C16),sat的检出率为7/9(C4、C10、C12、C13、C14、C15、C16),sen、set1A、set1B、ial、vir A、ics A、Sig A的检出率均为0。其中3株菌同时携带pic、sat、sep A,1株菌同时携带pic和sep A,1株菌同时携带sat和sep A。4、PFGE和多位点序列分析结果:9株鲍氏志贺菌共分为8个带型,相似性在63.21%~96.72%。以相似度90%判断为同一克隆群:C10和C13属于同一型,相似率为100%,其余菌株各为一型。MLST库分析显示,两株(C10和C13)属于ST131:adk(53)、fum C(40)、gyr B(47)、icd(13)、mdh(36)、pur A(28)、rec A(29);6株(C4、C8、C12、C14、C15、C16)属于ST648:adk(92)、fum C(4)、gyr B(87)、icd(96)、mdh(70)、pur A(58)、rec A(2);1株(C2)为ST10:adk(10)、fum C(11)、gyr B(4)、icd(8)、mdh(8)、pur A(8)、rec A(2)结论:1.本次分离的鲍氏志贺菌生化反应结果和大肠杆菌十分相似。2.本次分离的鲍氏志贺菌均为多重耐药菌,耐药情况严重。3.本次分离的鲍氏志贺菌均可检测到侵入性质粒相关抗原ipa H,与其他志贺菌血清型比较结果一致。4.通过PFGE和MLST分析发现,本次分离的鲍氏志贺菌流行病学相关性低,结合病人的就诊时间、临床症状,判断感染可能属散发。虽然其分离数量有所上升,但是我们缺乏一定的流行病学资料,对于分离率上升的原因还需进一步探究
[Abstract]:Objective: to study 9 strains of Shigella baumannii collected from outpatient clinic in summer of 2015, and to investigate the distribution and drug resistance of virulence genes of Shigella baumannii clinical isolates by biochemical identification, drug sensitivity identification, PCR amplification of virulence genes and PFGE technique. Molecular typing and epidemiological correlation among strains. Methods: 1. Shigella was isolated and cultured from feces of patients with diarrhoeal diseases in a comprehensive third class hospital in Tianjin in summer of 2015. Confirmed by routine biochemical identification and serological typing. Drug sensitivity analysis: K-B disk diffusion method was used for antibiotic susceptibility test. A total of 13 drugs were included: ampicillin, ceftazidime, streptomycin, gentamicin, SMZcoX, cefotaxime, ceftriaxone, tetracycline, norfloxacin, levofloxacin LVPN, amitoxacin AMK, cefoperazone-sulbactam, ceftriaxone, norfloxacin, levofloxacin, amicarbazone, cefoperazone-sulbactam. Detection of virulence genes: polymerase chain reaction (PCR) technique was used to amplify chromosomes and the virulence gene carried on the plasmids. The phylogenetic relationship of 9 Shigella baumannii strains was analyzed by electrophoretic Field Gel electrophoresis-PFGE technique. Results 9 strains of Shigella baumannii were classified into three subtypes: type 鈪，

本文编号：1949863