LMNA基因单核苷酸多态性与扩张型心肌病的相关性及对转录因子NKX2.5表达的影响

发布时间：2018-06-12 00:32

  本文选题：扩张型心肌病 + LMNA基因　； 参考：《青岛大学》2016年博士论文

【摘要】：研究目的：本研究旨在通过对大样本扩张型心肌病(DCM)患者的LMNA基因的单核苷酸多态性(SNP)的检测,发现某些未报道的SNP位点,明确其与扩张型心肌病之间的相关性,并根据研究结果,建立真核表达载体,测定其对转录因子NKX2.5表达量及mRNA荧光量的影响,探讨LMNA基因多态性诱发扩张型心肌病的可能机制。研究材料及方法：1.选取合适的患者群及患者数量、提取血样基因组,记录患者基线资料,并对其家族成员进行筛查、研究随访；进行LMNA基因SNP的检测,全部统计数据用Spss软件进行统计。相关性分析使用pearson多元逐步Logistic回归；用配对连锁不平衡检验计算连锁不平衡系数(coefficient of inkage disequilibrium, D'),用最大期望值法估算单倍型频率。2.建立真核表达载体,转染,测定NKX2.5表达量或mRNA荧光量。结果：1.对扩张型心肌病相关的LMNA基因SNP位点筛查方法的建立及样本检测,显示发现了四个突变的SNP位点,分别为rs4641、rs5380、s5058及Glu82Lys;,实验组和对照组的基因型贡献率具有统计学显著性差异(c 2=63.533,P=0.000),以CC型为参照,携带CT和TT基因的人群所患DCM的风险要显著增加(P0.01)；f进一步研究显示转染了Glu82Lys突变型的LMNA基因的细胞凋亡率、HEK293T/17系细胞蛋白(Lamin A/C)表达量均显著大于未转染载体、空载体及转染了Glu82Lys野生型LMNA基因的细胞。2.通过对LMNA基因SNP对转录因子NKX2.5表达的影响的研究,显示 转染了rs4641和Glu82Lys突变(G244A)型突变基因的P19CL6细胞系Nkx2.5基因nRNA表达量水平显著降低(P0.05),而转染了rs4641和Glu82Lys突变(G244A)型野生基因的细胞系Nkx2.5基因mRNA表达量水平基本没有变化(P0.05),转染了rs5380和rs5058型突变基因的细胞系Nkx2.5基因mRNA表达量水平与转染了rs5380和rs5058型野生基因的细胞系Nkx2.5基因mRNA表达量水平均基本没有变化(P0.05)；f以看家基因GADPH基因表达蛋白为参照,rs4641突变型及Glu82Lys突变(G244A) LMNA基因MT组较其他组有显著性降低。结论：1.rs4641、rs5380、rs5058三位点均为无意义突变,不会影响心肌细胞的收缩功能,但是rs4641突变具有评价DCM患病风险的作用；2. LMNA基因的Glu82Lys突变能够诱发心肌细胞功能异常,还与心肌细胞的凋亡有关；3.突变的LMNA基因(主要指rs4641突变和Glu82Lys突变(G244A)存在时细胞中转录因子Nkx2.5表达明显降低,显示LMNA基因与转录因子Nkx2.5表达存在关联,LMNA基因可能通过对转录因子的干预诱导DCM的发生。
[Abstract]:Objective: to detect the single nucleotide polymorphisms (SNPs) of LMNA gene in patients with dilated cardiomyopathy (DCM) in a large sample and to find out some unreported SNP loci and to determine the correlation between LMNA and dilated cardiomyopathy. Based on the results of the study, the eukaryotic expression vector was established to determine the expression of NKX2.5 and mRNA fluorescence, and to explore the possible mechanism of LMNA gene polymorphism inducing dilated cardiomyopathy. Research materials and methods: 1. Selected the appropriate patient group and patient number, extracted the blood sample genome, recorded the patient baseline data, and screened the family members, followed up the study; carried out the detection of LMNA gene SNP, all statistical data were analyzed by SPSS software. The correlation analysis used pearson multivariate stepwise logistic regression, the matched linkage disequilibrium test was used to calculate the linkage disequilibrium coefficient and the maximum expectation method was used to estimate the haplotype frequency. The eukaryotic expression vector was established and transfected. NKX 2.5 expression or mRNA fluorescence was measured. The result is 1: 1. The method for screening SNP loci of LMNA gene associated with dilated cardiomyopathy and the detection of the SNP loci of the LMNA gene showed that four mutation SNP loci were found. Rs4641, rs5380, S5058 and Glu82LysA, respectively. The genotypic contribution rates of the experimental group and the control group were significantly different from those of the control group. The risk of DCM in patients with CT and TT gene was significantly increased. Further study showed that the apoptosis rate of LMNA gene transfected with Glu82Lys mutant gene and the expression of HEK 293T / 17 cell protein were significantly higher than those of untransfected vector. Empty vector and transfected Glu82 Lys wild-type LMNA gene. The effect of LMNA gene SNP on the expression of transcription factor NKX2.5 was studied. The expression level of nRNA of Nkx2.5 gene was significantly decreased in P19CL6 cell line transfected with rs4641 and Glu82Lys mutant gene G244A, but the expression level of Nkx2.5 gene was almost unchanged in the cell line transfected with rs4641 and Glu82Lys mutant G244A) type wild gene. The mRNA expression level of Nkx2.5 gene in the cell line transfected with rs5380 and rs5058 mutant gene and the expression level of Nkx2.5 gene in the cell line transfected with rs5380 and rs5058 type wild genes were basically unchanged. Compared with the other groups, the MT group of LMNA gene of Glu82Lys mutation and Glu82Lys mutation was significantly lower than that of the other groups in reference to rs4641 mutation and Glu82Lys mutant G244A. Conclusion: 1. The three loci of rs4641, rs5380 and rs5058 are all meaningless mutations, which will not affect the contractile function of cardiomyocytes, but rs4641 mutation can evaluate the risk of DCM. The Glu82Lys mutation of LMNA gene can induce cardiac myocyte dysfunction and may be related to cardiomyocyte apoptosis. The expression of transcription factor Nkx2.5 was significantly decreased in the presence of mutant LMNA gene (mainly rs4641 mutation and Glu82Lys mutant G244A), indicating that LMNA gene and transcription factor Nkx2.5 expression were associated with LMNA gene, which might be induced by interference with transcription factor.
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2

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本文编号：2007395