Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中调控DNA损伤修复相关基因

发布时间：2018-06-27 21:13

  本文选题：卵巢癌 + 成纤维细胞　； 参考：《现代妇产科进展》2016年03期

【摘要】：目的:检测Dicer1在卵巢癌间质肿瘤相关成纤维细胞中的表达情况,探讨其对DNA双键断裂损伤(DSB)修复相关基因的影响。方法:应用基因集合富集分析(GSEA)方法分析卵巢癌间质和正常卵巢间质基因表达公共数据库GSE40595,探索Dicer1对DSB修复相关通路及关键基因的调控作用,并筛选出相关差异基因。应用重组人转化生长因子β1(h TGFβ1)细胞因子诱导成纤维细胞系MRC5细胞活化成为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs),即MRC5-CAFs。以靶向Dicer1基因的siRNA转染MRC5-CAFs,下调其Dicer1表达水平。qRT-PCR、Western blot法分别检测Dicer1及分析所得相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX、BRCA1、ATR、RAD51 mRNA水平及Dicer1和DSB损伤修复关键基因γ-H2AX(磷酸化H2AX)、RAD51蛋白水平。荧光共聚焦检测细胞核蛋白γ-H2AX表达;采用CCK8试验检测细胞活性。结果:GSEA分析结果显示,Dicer1表达水平与DSB(NES=1.7942109,FDRq=0.0067545176)及DNA损伤修复(NES=2.4433048,FDRq=0)显著正相关,进一步通过相关分析筛选出在上述通路中与Dicer1表达正相关的显著基因集。沉默MRC5-CAFs细胞中Dicer1表达后,DSB相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX及损伤修复相关基因BRCA1、ATR、RAD51均较对照组显著下降,与GSEA分析结果一致。荧光共聚焦显微镜检测到沉默Dicer1 MRC5-CAFs细胞内聚集较少的DSB。CCK8试验结果显示,MRC5-CAFs细胞在20μmol/L顺铂作用下,Dicer1-si组不同时间梯度的细胞活性率均低于NC-si组。结论:Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中正向调控DNA损伤修复相关基因,抑制Dicer1表达后其对顺铂敏感性显著增加。
[Abstract]:Aim: to detect the expression of Dicer1 in ovarian cancer stromal tumor-associated fibroblasts and to investigate the effect of Dicer1 on DNA double bond break injury (DSB) repair related genes. Methods: GSE40595, a common database for gene expression in ovarian cancer stromal and normal ovarian stroma, was analyzed by gene set enrichment analysis (GSEA). The regulatory effects of Dicer1 on DSB repair pathway and key genes were explored, and the differentially related genes were screened out. Recombinant human transforming growth factor 尾 1 (hTGF 尾 1) cytokines were used to induce the activation of MRC5 cells into tumor-associated fibroblasts (CAFs), that is, MRC5-CAFs. The Dicer1 gene was transfected into MRC5-CAFs by siRNA targeting Dicer1 gene. The expression level of Dicer1 was down-regulated. QRT-PCRN Western blot assay was used to detect Dicer1 and analyze the related genes, such as the level of XRCC6TP-53BP1AP-H2AFXT1-BRCA1AP-RAD51 mRNA and the RAD51 protein level of 纬 -H2AX (phosphorylated H2AX), a key gene for damage repair of Dicer1 and DSB. The expression of nuclear protein 纬 -H2AX was detected by confocal fluorescence, and the cell activity was detected by CCK8 assay. Results the expression level of Dicer1 was positively correlated with DSB (NES 1.7942109) and DNA damage repair (NESN 2.4433048 FDRq0). The significant gene sets associated with Dicer1 expression in the above pathway were screened by correlation analysis. After the expression of Dicer1 was silenced in MRC5-CAFs cells, the expression of DSB related genes, such as XRCC6, TP53BP1H2AFX, and the damage repair related gene BRCA1 / ATRN RAD51, were significantly lower than those in the control group, which were consistent with the results of GSEA analysis. The results of fluorescence confocal microscopy showed that the DSB.CCK8 assay of silent Dicer1 MRC5-CAFs cells showed that the cell viability of DSB.CCK8 cells in dicer1-si group was lower than that in NC-si group under 20 渭 mol / L cisplatin. Conclusion the gene associated with DNA damage repair is positively regulated by the expression of dicer1 in ovarian cancer stromal fibroblasts, and its sensitivity to cisplatin is significantly increased after the inhibition of Dicer1 expression.
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属同济医院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No:81372801)
【分类号】：R737.31

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本文编号：2075296