CARMA3基因敲减对结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移的抑制

发布时间：2018-07-15 09:31

【摘要】：目的:探讨CARMA3基因在人结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移中的作用及其机制。方法:选取高表达CARMA3的人结肠癌细胞株。应用慢病毒技术敲减CARMA3基因,puromycin筛选后构建稳定转染的HCT116-sh CARMA3细胞株。Real-time PCR和Western blot鉴定mRNA和蛋白表达的抑制情况。WST-1法和RTCA S16系统分析细胞增殖情况。集落形成实验观察集落形成。流式细胞术检测细胞周期。显微镜下观察上皮-间充质转化(EMT)形态变化。划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。Western blot分析相关分子变化,探讨可能机制。结果:4株人结肠癌细胞株中HCT116细胞的CARMA3 mRNA和蛋白表达量最高,构建稳定沉默CARMA3的HCT116-sh CARMA3细胞株,其中HCT116-sh CARMA3-93细胞中CARMA3的mRNA和蛋白受抑制最明显,将其作为细胞模型。相比于对照组,HCT116-sh CARMA3-93细胞形态发生EMT逆转,其增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。HCT116-sh CARMA3-93的G_0/G_1细胞所占比例明显升高,S期细胞比例相应下降(P0.05)。信号通路分子Bcl10和NF-κB表达明显下调,MALT-1变化不明显;细胞周期相关蛋白cyclin D1显著下调,cyclin A表达略有下降;侵袭转移相关分子MMP-2和MMP-9的表达下调,MMP-7未见改变,TIMP-1和TIMP-2的表达上调;EMT相关分子E-cadherin的表达水平升高,N-cadherin、Snail、Slug和Twist的表达水平呈不同程度降低。结论:CARMA3可通过改变细胞周期和侵袭转移分子的表达、调控EMT来影响结肠癌细胞HCT116的生长和侵袭转移。这可能与NF-κB信号通路发生改变有关。
[Abstract]:Aim: to investigate the role and mechanism of CARMA3 gene in the growth, invasion and metastasis of human colon cancer cell line HCT116. Methods: human colon cancer cell lines with high expression of CARMA3 were selected. The stable transfected HCT116-sh CARMA3 cell line. Real-time PCR and Western blot were used to identify the inhibition of mRNA and protein expression. WST-1 method and RTCA S16 system were used to analyze the proliferation of HCT116-sh CARMA3 cell line. Colony formation experiment observation of colony formation. Cell cycle was detected by flow cytometry. The morphological changes of epithelial-mesenchymal transformation (EMT) were observed under microscope. The changes of cell migration and invasion ability were detected by scratch test and Transwell assay. Western blot was used to analyze the molecular changes and explore the possible mechanism. Results the expression of CARMA3 mRNA and protein in HCT116 cells was the highest in human colon cancer cell lines. HCT116-sh CARMA3 cells were stably silenced. HCT116-sh CARMA3-93 cells had the most obvious inhibition of CARMA3 mRNA and protein. Compared with the control group, the morphological EMT reversal of HCT116-sh CARMA3-93 cells, the proliferation, colony formation, migration and invasion ability of HCT116-sh CARMA3-93 cells decreased significantly (P0.01). HCT116-sh CARMA3-93 GSP / G-1 cells accounted for a significant increase in the proportion of S phase cells (P0.05). The signal pathway molecules Bcl10 and NF- 魏 B down-regulated the expression of pMALT-1, while the expression of cyclin A decreased slightly by cell cycle related protein cyclin D1. The down-regulated expression of MMP-2 and MMP-9 did not change the expression of TIMP-1 and TIMP-2. The expression level of E-cadherin, an EMT related molecule, was increased and the expression levels of Slug and Twist were decreased in different degrees. Conclusion the growth, invasion and metastasis of human colon cancer cell line HCT116 can be affected by the regulation of EMT by changing the cell cycle and the expression of invasion and metastasis molecules in human colon cancer cell line HCT116. This may be related to the change of NF- 魏 B signaling pathway.
【作者单位】： 福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院肿瘤免疫学研究室;福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤转化医学重点实验室;
【基金】：国家临床重点专科建设项目资助 福建省卫生厅青年科研课题(No.2014-1-12)
【分类号】：R735.35

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本文编号：2123613