重组产气荚膜梭菌plc毒素基因植物乳酸杆菌的构建

发布时间：2018-07-29 10:13

【摘要】：依据乳酸菌的肠道益生作用,选择产气荚膜梭菌关键致病因子α毒素/磷脂酶C为抗原,构建产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段重组植物乳杆菌,利用植物乳酸菌穿梭载体pSIP409构建重组质粒pSIP409-plc,经双酶切鉴定和序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行SppIP诱导表达。Western Blot证明重组蛋白表达成功,并且主要以包涵体形式存在,plc重组蛋白相对分子质量分别为40 kDa。重组质粒pSIP409-plc分别电转化植物乳杆菌NC8细胞,PCR和双酶切鉴定正确后进行SppIP诱导表达。Western Blot和间接免疫荧光鉴定表明,构建的重组植物乳酸杆菌具有诱导分泌plc蛋白的能力,可作为黏膜免疫的候选抗原。
[Abstract]:According to the probiotic effect of lactic acid bacteria, the key pathogenic factor alpha toxin / phospholipase C of Clostridium perfringens was selected as antigen, and recombinant Lactobacillus plantarum was constructed by the PLC gene fragment of the alpha toxin producing peptide of Clostridium perfringens, and the recombinant plasmid pSIP409-plc was constructed by the shuttle carrier pSIP409 of plant lactobacillus, and was identified and sequenced by double enzyme cutting. After correct transformation of Escherichia coli BL21 (DE3) receptive cells and SppIP induced expression of.Western Blot, the recombinant protein was expressed successfully, and the expression of recombinant protein was mainly in the form of inclusion body, and the relative molecular mass of PLC recombinant protein was respectively 40 kDa. recombinant plasmid pSIP409-plc, respectively, the NC8 cells of Lactobacillus plantarum, PCR and double enzyme digestion were correctly identified. SppIP induced expression of.Western Blot and indirect immunofluorescence showed that the constructed recombinant lactobacilli had the ability to induce the secretion of PLC protein, which could be used as a candidate antigen for mucosal immunity.
【作者单位】： 黑龙江省兽医科学研究所;东北农业大学动物医学学院;黑龙江省讷河市动物防疫站;
【分类号】：S852.61

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