农杆菌介导的豌豆花瓣瞬间表达系统的建立及利用该系统对百脉根TCP基因亚细

发布时间：2016-12-16 18:02

  本文关键词：农杆菌介导大豆遗传转化研究进展及转基因作物现状，，由笔耕文化传播整理发布。

《上海交通大学》 2009年

农杆菌介导的豌豆花瓣瞬间表达系统的建立及利用该系统对百脉根TCP基因亚细胞定位的研究

李超  

【摘要】： 蛋白质在细胞中的定位与其功能和调控密切相关。为了简化研究蛋白质亚细胞定位步骤,减少实验所需时间,本文利用农杆菌原位注射的方法在豌豆花瓣中建立了瞬间表达系统,并利用该系统对百脉根中控制花发育对称性的TCP基因的亚细胞定位进行了研究。实验结果表明,通过该系统最快可以在注射30小时后观察到GUS基因的表达;百脉根TCP蛋白LjCYC1、LjCYC2、LjCYC3的C端与YFP融合后在细胞中的定位不同,其中部分结果符合预期,而这些TCP蛋白的N端与CFP融合后在细胞中的定位相似。共表达时,不同的融合蛋白会发生共定位,这提示我们百脉根TCP蛋白之间可能会发生相互作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：Q943.2
【目录】：

摘要5-6

ABSTRACT6-10

1. 绪论10-37

1.1 农杆菌转化植物细胞的机理10-15

1.2 瞬间表达技术在植物中的应用15-19

1.2.1 瞬间表达技术简介15

1.2.2 农杆菌转化15-16

1.2.3 双元Ti 载体（binary Ti vectors）与共转化（cotransformation）16-17

1.2.4 基因枪17-18

1.2.5 原生质体转化18-19

1.3 荧光蛋白标签技术在植物中的应用19-22

1.3.1 荧光蛋白简介19-21

1.3.2 荧光蛋白标签所在位置对定位结果的影响21-22

1.3.3 植物细胞中自发荧光对定位结果的影响22

1.4 蛋白质向细胞核的运输22-25

1.5 蛋白质向内质网的运输25-26

1.6 ABC 模型与豌豆花的原基发育26-27

1.7 被子植物花的对称性27-28

1.8 TCP 家族28-37

1.8.1 TCP 家族简介28-29

1.8.2 CYC/DICH 基因29-31

1.8.3 CIN 基因31-32

1.8.4 豆科中的cyc-like 基因32-35

1.8.5 TB1 基因35

1.8.6 PCF 亚家族35-37

2. 材料与方法37-44

2.1 材料与方法37-44

2.1.1 植物材料及种植条件37

2.1.2 菌株和质粒37

2.1.3 试剂37

2.1.4 引物合成37-38

2.1.5 过表达载体的构建38-40

2.1.6 热激法制备农杆菌EHA105 感受态40-41

2.1.7 热击法转化农杆菌EHA10541

2.1.8 农杆菌菌液注射侵染41-42

2.1.9 固定42-44

2.1.10.G US 染色43

2.1.11.D API 染色43-44

3. 实验结果44-56

3.1 农杆菌介导的豌豆叶片中瞬间表达44-46

3.1.1 侵染后培养时间对叶片中瞬间表达结果的影响44-45

3.1.2 LjCYC1-GFP 及free GFP 在叶片中瞬间表达得到的亚细胞定位结果45-46

3.2 农杆菌介导的豌豆花瓣中瞬间表达46-56

3.2.1 侵染后培养时间对花瓣中瞬间表达结果的影响46-47

3.2.2 TCP 蛋白C 端与YFP 融合后的亚细胞定位47-50

3.2.3 TCP 蛋白N 端与CFP 融合后的亚细胞定位50-52

3.2.4 不同融合蛋白组合共转化的结果52-56

4. 讨论56-59

4.1 关于农杆菌原位注射瞬间表达的优势及缺陷56-57

4.2 百脉根TCP 与荧光蛋白融合后的亚细胞定位57-59

4.2.1 LjCYC1-YFP 瞬间表达的定位与转基因植株中观察到的结果一致.57

4.2.2 CFP 与TCP 蛋白N 端融合可能干扰了TCP 蛋白向细胞核的运输.57

4.2.3 百脉根TCP 蛋白间可能存在着相互作用57-59

参考文献59-64

致谢64

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【引证文献】

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本文编号：215716