植物非组培转化方法获得转基因植株

发布时间：2016-12-16 18:02

  本文关键词：农杆菌介导大豆遗传转化研究进展及转基因作物现状，由笔耕文化传播整理发布。

《山西大学》 2011年

植物非组培转化方法获得转基因植株

张婷婷  

【摘要】：植物基因遗传转化最常用的方法农杆菌介导法和基因枪法已经使转基因作物的研究与开发取得了举世瞩目的成就。但这些方法依赖于组织培养,操作复杂,所用仪器昂贵,对操作者和实验设备都有很高的要求,难与常规育种相结合,因此植物非组培转化方法的研究具有重要意义。本研究采用超声波辅助花粉介导植物转基因方法将抗逆性相关受体类蛋白基因(OsSIK1)导入不同品种玉米白交系,以期获得对盐碱性、干旱具有一定程度抗性的转基因玉米材料,同时研究该方法在不同品种间转化率差异。此外,本研究还采用农杆菌介导的植物萌发种子基因转化法,以大豆萌发种子为外源基因受体,将含有crylAc抗虫基因的表达载体导入大豆中,以探讨该方法在大豆上的可行性,并根据大豆的具体情况对转化过程中的乙酰丁香酮浓度、超声波功率等因素进行试验,建立了适合于大豆的遗传转化体系。研究内容及结果如下： 1.花粉介导法转化玉米 (1)采用超声波辅助的花粉介导法,将含有OsSIK1基因的植物表达载体导入郑58,98-2-19,昌7-2三个玉米自交系品种中,在当代直接得到了T0代转化种子,其中郑58结籽272粒(结实率63.4%),98-2-19结籽27粒(结实率14.1%),昌7-2结籽167粒(结实率31.2%)。 (2)T1代植株经卡那霉素筛选和PCR检测,最终得到的转化植株数为：郑58,35株(转化率28.5%)：98-2-19,4株(转化率20.0%)：昌7-2,20株(转化率37.1%),初步外源基因已整合到玉米基因组中。 (3)T2代植株遗传率为：郑58,34.3%；98-2-19,12.5%；昌7-2,55.0%。通过对这3个自交系的转化处理结实率、转化率和导入基因遗传率的比较分析,证明花粉介导法对不同自交系品种的转化率间存在差异,自交系郑58,昌7-2更适合采用花粉介导法进行遗传转化。 2.植物萌发种子基因转化方法转化大豆 (1)采用超声波辅助的植物萌发种子基因转化法,以大豆萌发种子为外源基因受体,将含有bar基因及cry1Ac基因的表达载体p3301ubiAc导入大豆中,通过除草剂筛选、PCR检测,证明转化率平均为6.9%。 (2)优化大豆转化体系：研究了乙酰丁香酮浓度、超声波功率等因素对大豆转化效率的影响,并确定了幼苗期喷施除草剂的本底筛选浓度。结果表明,当转化的菌液浓度OD600为0.5～0.6,乙酰丁香酮的浓度为100μmol/L,超声波功率为800W时转化效率较高。 (3)用草丁膦浓度分别为1mg/L、1.5mg/L、2mg/L、3mg/L及5 mg/L的除草剂涂抹叶片,根据幼苗生长状态确定最佳的除草剂筛选浓度为1.5mg/L。在三叶期使用1.5mg/L的除草剂浓度进行筛选,可以淘汰大量非转基因和表达较弱的株系或个体,大大减少田间工作量及后期检测工作。

【关键词】：
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：Q943.2
【目录】：

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