产L-肉碱的大肠杆菌基因工程改造及生物转化

发布时间：2018-08-02 13:29

【摘要】：L-肉碱在脂肪代谢中起重要的作用,本文构建了T7启动子控制下的过表达质粒p ET28a-cai BCD和p ACYCD-cai F-cai T,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)(简写DE3)中,得到基因工程菌BL21(DE3)/cai BCD+cai F+cai T(简写DE3/BCD+F+T)。将此菌株接种到生长培养基中,并用终浓度为1 mmol/L的IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导培养,然后收集菌体细胞加入到含有巴豆甜菜碱盐酸盐的转化液中进行转化。结果显示,IPTG诱导4 h比诱导10 h后转化得到的L-肉碱量要高,转入了过表达质粒的工程菌DE3/BCD+F+T(7.244 g/L)比野生型DE3(0.5 g/L)提高了15倍。该巴豆甜菜碱盐酸盐转化生成L-肉碱的反应在2 h后基本达到稳定。
[Abstract]:L- carnitine plays an important role in fat metabolism. The overexpression plasmids p ET28a-cai BCD and p ACYCD-cai F-cai T under the control of T7 promoter were constructed and transferred into Escherichia coli BL21 (DE3) (DE3) to obtain genetic engineering bacteria BL21 (DE3) / cai BCD cai F cai T (DE3/BCD F T). The strain was inoculated into the growth medium and cultured with 1 mmol/L IPTG (isopropylthiogalactoside). Then the somatic cells were collected and added to the transformation solution containing crotonine hydrochloride for transformation. The results showed that the amount of L-carnitine was higher after 4 h induction than that after 10 h induction. DE3/BCD F T (7.244 g / L, which was transferred into the overexpression plasmid, was 15 times higher than that of wild type DE3 (0.5 g / L). The conversion of crotonine hydrochloride to L-carnitine was stable after 2 h.
【作者单位】： 中国科学院上海高等研究院;大连工业大学;上海科技大学;
【基金】：国家自然科学基金(31400042)
【分类号】：TS201.3

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本文编号：2159587