斑节对虾JNK信号通路中的JNK、C-JUN和ATF-2基因的克隆与功能研究

发布时间：2018-08-21 14:36

【摘要】：斑节对虾(Penaeus monodon)占据水产养殖重要的地位,同时因斑节对虾所具有的较高的产量和良好的质量,个体大、生长快、肉质鲜美和营养丰富等优点深受人们的喜爱,所以斑节对虾的市场前景广阔。但是现在斑节对虾养殖业的发展深受病害的制约,病害的爆发致使斑节对虾养殖业遭受巨大的损失。所以为斑节对虾的病害防治而深入研究其免疫防御机理,进而探索一条新的免疫防治途径。本研究为免疫防御机制的研究奠定了基础。JNK信号通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因均在不同的环境应激下激活,其中有渗透休克,紫外线辐射,热休克,氧化应激,细菌和病毒感染,并对蛋白质合成抑制剂,化疗剂,细胞死亡配体,免疫效应子和促炎细胞因子的合成和分泌起重要作用。在本研究中利用SMART-RACE技术克隆出斑节对虾免疫相关基因JNK信号通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因c DNA全长序列。通过qRT-PCR法研究了它们对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌刺激下的表达模式,并结合RNA干扰靶基因特异性沉默对JNK信号通路部分基因JNK、C-JUN和ATF-2基因及抗菌肽进行了关联分析。初步得到如下结果:PmJNK序列全长2645bp,包含一个147bp的5′非编码区(UTR)、1235 bp的3′非编码区(3′UTR),和1263 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码421个氨基酸的多肽,其理论相对分子量和理论等电点约为47.5 kDa和6.47。PmC-JUN序列全长1875bp包含一个134bp的5′非编码区(UTR)、844 bp的3′非编码区(3′UTR),和879 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码293个氨基酸的多肽,其理论相对分子量和理论等电点约为32.58 kDa和7.79。PmATF-2序列全长2291bp包含一个312bp的5′非编码区(UTR)、398 bp的3′非编码区(3′UTR),和1581 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码527个氨基酸的多肽,其理论相对分子量和理论等电点约为55.6 kDa和7.11。利用体外重组蛋白技术初步探究JNK信号通路部分基因JNK、C-JUN和ATF-2基因的蛋白在体外表达情况,体外重组蛋白的成功为今后深入探究JNK信号通路中JNK、C-JUN和ATF-2基因在斑节对虾免疫应答的调控功能奠定了基础。在对斑节对虾模式分析的过程中发现,PmJNK mRNA的表达量在血淋巴和，

本文编号：2196053