Lactobacillus kefiranofaciens乳糖酶基因克隆及在毕赤酵母中表达

发布时间：2018-08-24 16:52

【摘要】：以马乳酒样乳杆菌ZW3基因组为模板,PCR扩增得到乳糖酶中Lac L、Lac M两个大小亚基片段,经Eco RI和Sna BI双酶切后,分别连接p PIC9K质粒,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并验证其核苷酸序列正确。将重组质粒p PIC9K-Lac L、p PIC9K-Lac M分别电转化毕赤酵母GS115,构建p PIC9K-Lac L-GS115重组子和p PIC9K-Lac M-GS115重组子,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/m L,具有多拷贝基因的重组子。经反转录PCR验证,c DNA上存在Lac L片段,并可检测到乳糖酶酶活达到1.17 U/m L;p PIC9K-Lac M-GS115重组子诱导表达72 h后的发酵液上清经SDS蛋白电泳检测到目的条带。
[Abstract]:Two large and small subunits of Lactobacillus lactobacillus were amplified from Lactobacillus cereus ZW3 genome by PCR. After being digested by Eco RI and Sna BI, the two subunits were ligated into p PIC9K plasmids, respectively. DH5 伪 was transformed into Escherichia coli competent cells and its nucleotide sequence was confirmed to be correct. The recombinant plasmid p PIC9K-Lac Ln p PIC9K-Lac M was electrotransformed into Pichia pastoris GS115, to construct p PIC9K-Lac L-GS115 recombinant and p PIC9K-Lac M-GS115 recombinant respectively. The recombinant plasmid with 3. 0 mg/m / L anti-G418 concentration was obtained. Reverse transcriptional PCR confirmed the existence of Lac L fragment on c DNA, and the supernatant of fermentation broth with lactase activity up to 1.17 UL / ml PIC9K-Lac M-GS115 for 72 h was detected by SDS protein electrophoresis.
【作者单位】： 天津科技大学食品工程与生物技术学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31171629) 天津科技大学大学生实验室创新基金项目(1414A303)
【分类号】：Q78;Q55

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本文编号：2201432