解脂亚罗酵母中HMGR基因的生物信息学分析及催化域部分表达

发布时间：2018-09-07 15:31

【摘要】：对解脂亚罗酵母中甲羟戊酸途径的限速酶HMGR进行了生物信息学分析,克隆其活性结构域(tHMG,第441~875位氨基酸),并与标记分子GFP共表达。生物信息学分析表明,HMGR基因可编码一个含有999个氨基酸的疏水性不稳定蛋白,该蛋白前500个氨基酸肽链含有较多的跨膜区,其理论分子量和等电点分别为254.93kDa和4.77;活性结构域包含506个氨基酸,理论分子量和等电点分别为127.74kDa和4.93,不含跨膜区。两个蛋白的二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,三级结构均以同源四聚体的状态存在。在激发光(488nm)下观察融合表达tHMGGFP的酵母细胞,发现产生绿色荧光。经测定解脂亚罗酵母超表达催化域(tHMG)后,酶比活为1.14U/mg,比对照组提高了62.7%,此结果说明HMGR催化域部分可以独立表达,提高细胞内的HMGR酶活水平。
[Abstract]:The rate-limiting enzyme HMGR of mevalic acid pathway in Lipirolimus cerevisiae was analyzed by bioinformatics, and its active domain (tHMG, 441 ~ 875 amino acid) was cloned and co-expressed with the marker GFP. Bioinformatics analysis showed that the HMGR gene could encode a hydrophobic unstable protein containing 999 amino acids. The theoretical molecular weight and isoelectric point are 254.93kDa and 4.77, respectively. The active domain contains 506 amino acids, and the theoretical molecular weight and isoelectric point are 127.74kDa and 4.93, respectively. The secondary structures of the two proteins were mainly 伪 -helix and irregular crimp, and the tertiary structures existed in the state of homologous tetramer. The yeast cells fused with tHMGGFP were observed under excitation light (488nm) and found to produce green fluorescence. The specific activity of (tHMG) was 1.14 U / mg, which was 62.7% higher than that of the control group. The results showed that the catalytic domain of HMGR could be expressed independently and the activity of HMGR in cells could be increased.
【作者单位】： 陕西师范大学食品工程与营养科学学院;
【基金】：陕西省科技统筹项目(2015KTCQ02-07) 国家重点科技研发计划(2017YFD0400700)
【分类号】：Q811.4;Q936

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