沉默RIPK4基因表达增强TNF-α诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的敏感性

发布时间：2018-12-06 10:20

【摘要】：目的:探讨沉默受体相互作用蛋白激酶4(receptor interacting protein kinase4,RIPK 4)基因表达对增强肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法将特异性针对RIPK 4基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞(RIPK4-siRNA转染组),以转染阴性对照-siRNA(negative control-siRNA,NC-siRNA)作为阴性对照组,同时设仅用人重组TNF-α处理MG-63细胞的阳性对照组以及RIPK4-siRNA转染MG-63细胞后再行TNF-α处理组。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测MG-63细胞的增殖情况;Hoechst 33258染色法检测MG-63细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测骨肉瘤MG-63细胞RIPK4蛋白及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-xL和caspase-3的表达情况。结果:RIPK4-siRNA转染MG-63细胞后,RIPK4蛋白的表达水平明显下调(P0.05)。RIPK4-siRNA转染组、NC-siRNA转染组、TNF-α阳性对照组和RIPK4-siRNA转染+TNF-α组细胞的EdU阳性表达率分别为60.7%、39.6%、43.3%和16.7%,RIPK4-siRNA转染组细胞的增殖能力较NC-siRNA转染组明显降低(P0.05),RIPK4-siRNA转染+TNF-α组细胞的增殖能力较RIPK4-siRNA转染组和TNF-α阳性对照组明显降低(P值均0.05)。RIPK4-siRNA转染组发生凋亡的细胞数较NC-siRNA转染组增多(P0.05),RIPK4-siRNA转染组+TNF-α组发生凋亡的细胞数较RIPK4-siRNA转染组和TNF-α阳性对照组明显增多(P值均0.05)。与NC-siRNA转染组相比,RIPK4-siRNA转染组中Bax和caspase-3蛋白的表达水平均明显上调,而Bcl-xL蛋白的表达水平下调,差异均有统计学意义(P值均0.05);RIPK4-siRNA转染组+TNF-α组中Bax和caspase-3蛋白表达水平均较RIPK4-siRNA转染组和TNF-α阳性对照组明显上调,而Bcl-xL蛋白的表达水平进一步下调,差异均具有统计学意义(P值均0.05)。结论:沉默RIPK 4基因表达可诱导骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡,并且可以增强TNF-α诱导的细胞凋亡的敏感性。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of silencing receptor interacting protein kinase 4 (receptor interacting protein kinase4,RIPK 4) gene expression on the apoptosis of osteosarcoma MG-63 cells induced by tumor necrosis factor 伪 (tumor necrosis factor- 伪 (TNF- 伪). Methods: siRNA specific for RIPK 4 gene was transfected into MG-63 cells of osteosarcoma (RIPK4-siRNA transfection group) by liposome transfection, and negative control group (siRNA (negative control-siRNA,NC-siRNA) was used as negative control group. At the same time, the MG-63 cells were treated with human recombinant TNF- 伪 only as the positive control group, and the RIPK4-siRNA transfected MG-63 cells were treated with TNF- 伪. 5-ethynyl-2oxy-deoxyuridine, 5-ethynyl-2- deoxyuridine, were treated with 5-ethynyl-2- deoxyuridine, and then treated with TNF- 伪. EdU) method was used to detect the proliferation of MG-63 cells. The apoptosis of MG-63 cells was detected by Hoechst 33258 staining and the expression of RIPK4 protein and apoptosis-related proteins Bax,Bcl-xL and caspase-3 in MG-63 cells of osteosarcoma were detected by Western blot. Results: after RIPK4-siRNA was transfected into MG-63 cells, the expression of RIPK4 protein was significantly down-regulated (P0.05). RIPK4-siRNA transfection group, NC-siRNA transfection group, the expression level of RIPK4 protein decreased significantly (P0.05). The positive expression rates of EdU in TNF- 伪 positive control group and RIPK4-siRNA transfected TNF- 伪 group were 60.763% and 16.7%, respectively. The proliferation ability of RIPK4-siRNA transfected group was significantly lower than that of NC-siRNA transfection group (P0.05). The proliferation ability of TNF- 伪 cells transfected with RIPK4-siRNA was significantly lower than that of RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 伪 positive control group (P < 0. 05). The number of apoptotic cells in RIPK4-siRNA transfection group was higher than that in NC-siRNA transfection group (P0.05). The number of apoptotic cells in TNF- 伪 group in RIPK4-siRNA transfection group was significantly higher than that in RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 伪 positive control group (P < 0. 05). Compared with the NC-siRNA transfection group, the expression of Bax and caspase-3 protein in the RIPK4-siRNA transfection group was significantly up-regulated, while the expression level of Bcl-xL protein was down-regulated (P < 0. 05). The expression levels of Bax and caspase-3 protein in TNF- 伪 group of RIPK4-siRNA transfection group were significantly higher than those in RIPK4-siRNA transfection group and TNF- 伪 positive control group, while the expression of Bcl-xL protein was further down-regulated. The difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion: silencing the expression of RIPK 4 gene can induce apoptosis in MG-63 cells of osteosarcoma and enhance the sensitivity of apoptosis induced by TNF- 伪.
【作者单位】： 兰州大学第二医院骨科;武威市人民医院骨科;兰州大学第二医院风湿免疫科;甘肃省肿瘤医院骨与软组织肿瘤科;
【基金】：甘肃省基础研究创新群体项目(编号:1308RJIA004)~~
【分类号】：R738.1

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9 朱U，

本文编号：2365881