烟粉虱MED隐种气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA克隆及原核表达

发布时间：2018-12-11 18:25

【摘要】：采用RT-PCR和RACE技术成功克隆烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全长。BtabOBP2(Gen Bank登录号:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登录号:AIS71884)的cDNA序列全长分别为1107 bp和874 bp,完整开放阅读框(ORF)分别为744 bp和429 bp,分别编码247和142氨基酸,BtabOBP4有6个保守的半胱氨酸,属于典型OBP,而BtabOBP2除了具有典型OBP的6个半胱氨酸,增加了3个保守的半胱氨酸,属于Plus-C OBP。将得到的BtabOBP2和BtabOBP4重组到原核表达载体pET30a(+),转化入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,用IPTG诱导融合蛋白表达。采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化融合蛋白,并进行Western blot分析。结果显示,BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大肠杆菌中均有可溶性表达,Western blot结果证实所表达的融合蛋白确实为目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表观分子量比预测的分子量大了6.53 k Da,用重组肠激酶切掉6×His标签后,目的蛋白的表观分子量与预测分子量相近,偏差降低,说明6×His标签是造成融合蛋白表观分子量偏差的原因。本研究明确了烟粉虱气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征,并成功进行了原核表达和纯化,为进一步研究这两个OBP基因的分子结构和功能奠定了基础。
[Abstract]:Cloning of Bemisia tabaci (Gennadius) odor binding protein (odorant binding protein, from whitefly by RT-PCR and RACE techniques OBP) BtabOBP2 and BtabOBP4. BtabOBP2 (Gen Bank accession number: AIS71883) and BtabOBP4 (Gen Bank accession number: AIS71884) cDNA sequence is 1107 bp and 874 bp, complete open reading frame (ORF) is 744 bp and 429 bp, respectively. Encoding 247 and 142 amino acids, respectively, BtabOBP4 has six conserved cysteines, which belong to typical OBP, while BtabOBP2 adds three conserved cysteines to Plus-C OBP. in addition to the six cysteine of typical OBP. The obtained BtabOBP2 and BtabOBP4 were recombined into the prokaryotic expression vector pET30a (), and transformed into BL21 (DE3) Escherichia coli competent cells. IPTG was used to induce the expression of the fusion protein. The fusion protein was purified by affinity chromatography and gel filtration chromatography and analyzed by Western blot. The results showed that both BtabOBP2 and BtabOBP4 fusion proteins were soluble expressed in E. coli. The Western blot results confirmed that the expressed fusion protein was the target protein. The apparent molecular weight of the BtabOBP2 fusion protein in SDS-PAGE was 6.53k Da, higher than the predicted molecular weight, and the 6 脳 His label was removed by recombinant enterokinase. The apparent molecular weight of the target protein was similar to that of the predicted molecular weight, and the deviation was decreased, which indicated that the 6 脳 His tag was the cause of the apparent molecular weight deviation of the fusion protein. In this study, the nucleotide and amino acid sequence characteristics of BtabOBP2 and BtabOBP4 genes of Bemisia Tabaci odor binding protein were confirmed, and the prokaryotic expression and purification were successfully carried out, which laid a foundation for further study on the molecular structure and function of these two OBP genes.
【作者单位】： 山东省农业科学院农业资源与环境研究所农业部废弃物基质化利用重点实验室山东省农业面源污染防控重点实验室;山东省农业科学院生物技术研究中心;
【基金】：山东省农业科学院青年科研基金(2015YQN36);山东省农业科学院农业科技创新工程(CXGC2017A01) 山东省博士后创新项目专项资金(201203025) 山东省现代农业产业技术体系食用菌创新团队建设项目(SDAIT-07-01)
【分类号】：S433.39

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本文编号：2373014