纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析

发布时间：2018-12-31 15:08

【摘要】：纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增B.subtilis natto的aprN基因,并依据B.subtilis的密码子偏好性优化了起始30个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B.subtilis,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42)U/mL,是野生菌的3.9倍,酶活力表达稳定性良好。
[Abstract]:Nattokinase is encoded by the aprN gene of Bacillus natto (Bacillus subtilis natto) and has strong fibrinolytic activity in vivo and in vitro. The aprN gene of B.subtilis natto was amplified by polymerase chain reaction (polymerase chain reaction,PCR) technique, and the codon of 30 amino acids was optimized according to the codon preference of B.subtilis. The recombinant expression plasmid pHT01-aprN. was constructed. Restriction enzyme digestion, PCR amplification and sequencing proved the correctness of the encoding. PHT01-aprN containing strong promoter was introduced into B. subtilis by electroporation, and B.s 168/pHT01-aprN engineering strain was obtained by chloramphenicol resistance screening. After IPTG induction, the highest enzyme activity was (289.00 卤3.42) U / mL, which was 3.9-fold higher than that of wild bacteria, and the stability of enzyme activity was good.
【作者单位】： 上海交通大学农业与生物学院陆伯勋食品安全研究中心;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31171737)
【分类号】：Q55;Q78

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 颜思旭,陈素丽,陈璇璇,蔡红玉,林岳夫;文昌鱼碱性磷酸酶功能基团的修饰与酶活力变化关系[J];厦门大学学报(自然科学版);1980年04期

2 钟传欣;;酶活力的量和单位的用法探讨[J];贵州教育学院学报;2008年12期

3 张振清;;纤维素酶活力的计算方程[J];植物生理学通讯;1980年03期

4 付丽红;工业胰酶活力的变化规律及应用[J];皮革化工;1997年04期

5 刘翠然;王实;李卫国;徐颂立;王志学;王琳;侯进怀;仉怀林;朱东明;郭玫;霍勇萍;黄翠萍;;太行猕猴血清六种酶活力的测定[J];河南师范大学学报(自然科学版);1993年01期

6 顾谦,滕德斌,严洁,严景华,李纯;加压对茶叶加工中酶活力影响的研究[J];激光生物学报;1999年02期

7 王少华;张红梅;孙强;徐淑霞;贾新成;吴坤;;杂色云芝突变株酶活力变化及遗传特性研究[J];河南农业大学学报;2006年02期

8 陈素丽,黄琼英;文昌鱼酸性磷酸酯酶的化学修饰[J];厦门大学学报(自然科学版);1986年05期

9 张克庞;陈秀芳;;损伤兔大脑皮层表层引起深层酸性及碱性磷酸酶的变化[J];生理学报;1966年01期

10 赵德臻,季川,李士?,许如君;大鼠再生肝中蛋白二硫还原酶的提纯及性质的初步研究[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1964年06期

相关会议论文 前7条

1 秦永发;郑易之;马福荣;;高压静电场对小麦矿质营养吸收与根H+-ATP酶活力的影响[A];第三届全国现代生物物理技术学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年

2 朱伯明;李楙笙;杝明璧;;小白鼠注射皮岅醇後肝中谷-丙廔氨酶活力和糖元up生作用有曑因素的媻化[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编（生物化学）[C];1964年

3 潘碧霞;邵W英;杝奿f，

本文编号：2396753