桃ABA信号关键基因PpABI5酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

发布时间：2019-01-01 17:36

【摘要】：脱落酸(ABA)在植物的生长发育中起着重要的作用,ABI5是响应ABA信号的关键基因,研究调控ABI5基因表达的转录因子对进一步阐述ABA信号转导及调控具有重要意义。本研究中,将3-AF1、Box I和Sp1三次重复串联后连接到pAbAi诱饵质粒上,转化酵母细胞构建诱饵载体,构建桃(Prunus persica)酵母单杂交cDNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选PpABI5启动子的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为1×10~7 CFU,插入片段长度平均在1 500 bp左右。酵母单杂交筛选结果经测序和Blast同源性分析,获得PpDAM3和PpDAM5两个转录因子。酵母单杂交进一步证实PpDAM3和PpDAM5能与PpABI5启动子结合。这些研究结果表明,PpDAM3和PpDAM5可能参与调控PpABI5的转录,并为深入研究ABA信号转导通路奠定基础。
[Abstract]:Abscisic acid (ABA) plays an important role in plant growth and development. ABI5 is a key gene in response to ABA signal. It is important to study the transcription factors regulating the expression of ABI5 gene in order to further elucidate ABA signal transduction and regulation. In this study, 3-AF1BX box I and Sp1 were connected to the pAbAi bait plasmid three times in tandem, then transformed into yeast cells to construct the bait vector, to construct the single hybrid cDNA library of Peach (Prunus persica) yeast, and then to co-transform the bait strain. The upstream transcription regulator of PpABI5 promoter was screened by homologous recombination. The average length of the cDNA library is about 1 脳 10 ~ (7) CFU,. The average length of the inserted fragment is about 1 500 bp. Two transcription factors, PpDAM3 and PpDAM5, were obtained by sequencing and Blast homology analysis. Yeast single hybridization further confirmed that PpDAM3 and PpDAM5 could bind to PpABI5 promoter. These results suggest that PpDAM3 and PpDAM5 may be involved in the regulation of PpABI5 transcription and lay a foundation for further study of ABA signal transduction pathway.
【作者单位】： 山东农业大学园艺科学与工程学院作物生物学国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31672137) 山东省自然科学基金(ZR2014CM015)~~
【分类号】：Q943.2;S662.1

【参考文献】

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本文编号：2397892