WT1基因rs16754多态性与急性髓系白血病患者临床特征及预后关系的研究并meta分析

发布时间：2019-03-28 09:22

【摘要】：目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者WT1 rs16754位点等位基因及基因型分布情况及其与发病风险的关系;比较WT1 rs16754位点主要等位基因纯合型(GG型)与至少含一个次要等位基因(GA/AA型)AML患者的各临床指标水平、细胞核型异常率及FLT3-ITD突变率;比较GG型与GA/AA型患者化疗完全缓解情况及总体生存时间,明确WT1基因rs16754位点多态性与AML患者化疗敏感性及预后的关系;采用meta分析方法总结该位点多态性与AML预后的关系。方法:1、WT1基因rs16754位点基因型分布情况及与发病风险的关系收集115例AML住院患者初诊时骨髓及177名健康体检者外周血样本,提取DNA,WT1基因rs16754多态性位点两侧设计一对引物,采用高分辨熔解曲线法(HRM)进行基因多态性位点分型;分型后各基因型随机抽取5个样本通过聚合酶链反应(PCR)扩增WT1基因第7外显子(共151 bp),扩增后送华大基因测序验证HRM法分型的准确性,比较病例组与健康对照组该位点基因型分布有无差异。2、WT1基因rs16754位点不同基因型AML患者各临床指标间的比较收集AML患者临床各项检查指标,包括:年龄、性别、外周血白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、中性粒细胞计数、乳酸脱氢酶量、骨髓原始细胞比例、WHO(2008)分型分布;染色体核型分析采用R显带技术;聚合酶链反应扩增FLT3-ITD基因,产物经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶成像系统拍照读取结果。分别对主要等位基因纯合型组与至少含一个次要等位基因组AML患者以上各项指标进行统计学描述及比较。3、WT1基因rs16754位点不同基因型AML患者组化疗反应及生存情况间的比较查阅病例获知AML患者各自的化疗方案,比较主要等位基因纯合型组与至少含一个次要等位基因组AML患者在化疗用药方案上组间有无差别。以查阅病历和电话随访的形式进行随访,总生存(OS)期定义为确诊至死亡或末次随访的时间,比较两组患者化疗后完全缓解情况及总体生存时间。4、WT1基因rs16754多态性位点与AML患者预后关系的meta分析以英文检索词“WT1”“polymorphism”“Leukemia,Myeloid,Acute”检索Pub Med数据库,同时以检索词“WT1”、“多态性”、“急性髓系白血病”检索中国知网(CNKI)、万方数据库(Wan Fang)和中国生物医学文摘数据库(CBM),时间截止至2015年12月1日。结果:1、115例初发AML患者中,GG型59例(51.3%),GA型43例(37.4%),AA型13例(11.3%)。健康对照组177例,GG型94例(53.1%),GA型72例(40.7%),AA型11例(6.2%)。其中有1例患者采用HRM法多次分型结果不理想,故将其PCR产物送华大基因测序。随机抽取的15个样本采用直接测序与HRM法分型法分别检测,两种方法检测结果100%一致。患者与健康对照组间基因型分布差异无统计学意义(P=0.296),且两组间年龄(P=0.472)、性别(P=0.596)分布差异也无统计学意义,即组间均衡可比。对照组该位点基因型分布服从Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P=0.938)。对于AML患者,rs16754 G为其主要等位基因,该位点基因型与AML发病风险无关。2、56例(48.7%)GA/AA型与59例(51.3%)GG型患者在骨髓原始细胞比例上差异有统计学意义(P=0.028)。WT1 rs16754多态性位点GA/AA基因型组与GG基因型组患者在年龄(P=0.825)、性别(P=0.483)分布上无统计学差异;比较两组WBC(P=0.823)、RBC(P=0.479)、HGB(P=0.356)、PLT(P=0.455)、中性粒细胞计数(P=0.737)、LDH含量(P=0.804)、WHO(2008)分型(P=0.439)、染色体核型(P=0.357)及FLT3-ITD突变情况(P=0.480),差异均无统计学意义。3、59例GG型患者化疗后,CR 51例(86.4%),56例GA/AA型患者化疗后CR 47例(83.9%),差异无统计学意义(P=0.704)。115例患者随访期间,其中16例失访,99例得到生存情况信息,包括GA/AA组45例,GG组54例;共有5例患者行移植术(行异基因造血干细胞移植术2例,行自体造血干细胞移植术2例,行微移植术1例);GG组3例(5.6%),GA/AA组2例(4.4%),组间移植率无统计学差异(P=1.000)。用Kaplan-Meier法估算患者OS率。经Log-rank检验,两组间OS率差异有统计学意义(P=0.035)。相对于GA/AA组患者组,GG组患者组OS率更高,提示等位基因A可能是患者预后的危险因素。采用COX比例风险模型进行分析,校正年龄(≥60岁和60岁)和性别两因素,结果显示rs16754位点A等位基因是AML患者生存情况的独立预后因素,GA/AA型患者死亡的风险高于GG型患者(HR=1.681,95%CI 1.046~2.700,P=0.032)。4、本次meta分析共纳入11篇英文文献,本研究第一部分结果也纳入分析,样本量共计2904例。meta分析结果显示,rs16754与AML患者化疗敏感性指标CR情况无相关性(RR=1.02,95%CI:0.99-1.06,P=0.23),与结局指标总体生存(OS)(HR=0.77,95%CI:0.52-1.15,P=0.21)、5年OS(RR=1.10,95%CI:0.90-1.34,P=0.37)及无复发生存期(RFS)(HR=0.80,95%CI:0.54-1.19,P=0.27)也无关联。结论:1、WT1基因rs16754多态性位点与AML发病风险无关。将患者分为GA/AA组和GG组,两组在年龄、性别分布上差异均无统计学意义。2、GA/AA组和GG组各临床指标比较结果显示在WBC、RBC、HGB、PLT、中性粒细胞计数、LDH水平、WHO(2008)分型及核型情况两组差异均无统计学意义。两组FLT3-ITD突变率无差别,但GA/AA组骨髓原始细胞比例更高。3、WT1基因rs16754多态性位点与化疗敏感性无关。分析99例AML患者生存情况,GG组患者OS率高于GA/AA组患者,年龄(≥60岁和60岁)和性别两因素校正后,结果显示rs16754位点A等位基因与AML患者预后有关,GA/AA型患者死亡的风险高于GG型患者,提示等位基因A可能是预后的危险因素。4、WT1基因rs16754位点与AML预后各指标无相关性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

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本文编号：2448743