RNAi沉默PTHrP基因的表达对SPC-A-1BM细胞侵袭力影响的研究

发布时间：2019-05-31 17:57

【摘要】：目的:探讨甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHr P)基因的沉默对SPC-A-1BM细胞侵袭能力及其对细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因表达的影响。方法:本实验共设置5个组,其中1-3组为实验组(小si RNA干扰组,针对目的PTHr P基因设计3条不同序列的si RNA-PTHr P),4组:阴性对照组(非特异性阴性对照si RNA),5组:空白对照组(无si RNA干扰)。通过核酸转染试剂脂质体Lipofectamine TM2000(Lipo2000)介导小干扰si RNA转染高转移性人肺腺癌细胞株(SPC-A-1BM)细胞;Transwell细胞迁移实验用于检测转染后SPC-A-1BM细胞的侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于检测转染后PTHr P基因的RNA表达水平;Western-Blot方法检测转染后PTHr P及RANKL的表达水平。结果:转染12小时后进行的Transwell试验,显示各组穿过Transwell人工膜并附着于上层小室底面的细胞,分别进行细胞计数,并进行统计分析。结果显示PTHr P特异性转染组(1组、2组、3组)与对照组(4组、5组)相比,穿过人工膜的数量明显减少,抑制率分别为63.8%、60.3%、66.0%,经单因素方差分析,LSD法组间两两比较,结果显示,实验组1、实验组2、实验组3均和对照组4组及5组的差异有统计学意义(P0.01),4组与5组间无明显差异(P0.05);Real-time PCR实验显示,实验组1组、2组及3组的PTHr P基因的表达显着被抑制,抑制率分别为72%、75%、73%(P0.01),而对照组4组与5组之间对比,PTHr P基因的表达并没有统计学差异;Western-Blot实验显示,对于PTHr P蛋白,实验组1组、2组、3组的条带灰度值之间无统计学差异(P0.05);4组、5组条带之间无统计学差异(P0.05);无论1组、2组还是3组,它们的条带灰度值与4组、5组对比,差异均具有统计学意义(P0.01)。而对于RANKL蛋白而言,同样的,1组、2组、3组的条带灰度值之间无统计学差异,(P0.05);4组、5组条带之间无统计学差异,(P0.05);无论1组、2组还是3组,它们的条带灰度值与4组、5组对比,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:利用RNAi技术转染SPC-A-1BM细胞沉默PTHr P基因可明显抑制肿瘤细胞的侵袭能力,并能减少RANKL蛋白的表达;本实验为PTHr P介导的骨转移瘤基因沉默疗法提供了理论基础,肺癌骨转移的治疗提供了新的治疗靶点。
[Abstract]:Objective: to investigate the invasiveness of parathyroid hormone associated protein (parathyroid hormone-related protein,PTHr P) gene silencing on SPC-A-1BM cells and its effect on nuclear factor kappa B receptor activating factor ligand (receptor activator of nuclear factor- kappa B ligand,. Effect of RANKL) gene expression. Methods: five groups were set up in this experiment, of which 1 鈮，

本文编号：2489910