雷公藤红素对HLA-B27基因启动子活性影响的研究

发布时间：2019-08-27 09:09

【摘要】：目的：通过观察雷公藤红素对AS患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)活性的影响,检测不同浓度雷公藤红素作用下HLA-B27及其启动子相关激活因子TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6表达的变化,为雷公藤治疗AS的分子机制提供新的依据。方法：1、为了研究雷公藤红素对AS患者PBMC的细胞毒作用,本实验采用3例确诊AS患者外周血,提取PBMC进行细胞培养,24小时后加入不同浓度雷公藤红素,共同培养48小时后进行Cell Counting Kit-8 (CCK-8)检测,以评估雷公藤红素对PBMC细胞活性的影响。2、为了证明雷公藤红素对AS患者PBMC中HLA-B27基因启动子可能存在抑制作用,本实验采用10例确诊AS患者10ml外周血提取PBMC,24小时后加入不同浓度雷公藤红素，共同培养48小时后提取RNA。采用Real-time PCR的方法检测细胞中HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β及IL-6 mRNA表达变化。同时收集上清液,采用ELISA的方法检测HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6细胞因子水平变化。结果：1、发现雷公藤红素浓度低于1.0μmol/L时,对AS患者PBMC细胞活性无明显抑制作用(p0.05);当浓度高于3.0μmol/L时,雷公藤红素对PBMC细胞活性呈明显抑制作用(p0.05)2、发现AS患者PBMC加药组与对照组相比,HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 mRNA量随雷公藤红素浓度增高而呈降低趋势,特别是当雷公藤红素浓度为1.0μmol/L时,抑制作用最强,其中HLA-B27和TNF-α, IL-1β, IL-6 mRNA表达量的变化具有统计学意义(p0.05);AS患者PBMC加药组与对照组相比HLA-B27和TNF-aIFN-γ, IL-1β, IL-6细胞因子水平呈降低趋势,同样当雷公藤红素浓度为1.Oμmol/L时,抑制作用最强,其中TNF-α, IL-1β, IL-6水平的变化具有统计学意义(p0.05)。结论：1、雷公藤红素在高浓度时对AS患者PBMC细胞活力有抑制作用,但在一定浓度范围内对PBMC细胞活力无明显影响,说明在一定浓度范围内雷公藤红素无明显细胞毒性。2、雷公藤红素作用下HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6表达均降低,提示雷公藤红素可能通过抑制TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6等因子来影响HLA-B27基因启动子活性,从而降低HLA-B27的表达。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285

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本文编号：2529669