农杆菌介导ZmSERK基因转化玉米体胚

发布时间：2019-09-19 14:51

【摘要】：本研究利用RT-PCR技术克隆玉米体细胞胚胎发生关键基因Zm SERK(Gen Bank登录号:KJ0045-22),并构建植物过表达载体p CAMBIA3301-Zm SERK和干扰载体P3301-UBI-Zm SERK(+)-intron-Zm SERK,利用农杆菌介导法将过表达载体、干扰载体、空载体转入供试品种的玉米体细胞胚胎中,得到阳性植株,阳性率分别为11.5%、12.5%、9.1%。随后对阳性植株进行分子检测和表达分析。
【图文】：

瞻锥哉盏?9%左右。3301空载体阳性植株与空白对照相比，，ZmSERK基因的表达量几乎不变；过表达载体阳性植株中，ZmSERK基因的表达量与空白对照相比略有升高，但幅度不大。2讨论玉米转基因最大问题是转化受体受基因型限制很大。许多玉米基因型即使获得了胚性愈伤组织，大部分是通过器官发生途径再生成苗(Sujayetal.,2010)，器官发生再生植株一般要经过脱分化和再分化过程，不仅诱导分化率、成苗率低，而且芽和根要分别在不同条件下诱导，因而时间较长。而一直以来玉米遗传转化受体A188、Hi-Ⅱ、H99等，诱导形成的胚图1阳性植株Bar基因PCR检测注:M:DL2000marker;P:阳性对照(pCAMBIA3301质粒);W:阴性对照(水);1:过表达载体阳性植株;2:3301空载体阳性植株;3:干扰载体阳性植株Figure1PCRdetectionofbargeneinpositiveplantsNote:M:DL2000marker;P:Positivecontrol(TheplasmidofpCAMBIA3301-ZmSERK);W:Control(H2O);1:Over-expressionvectorpositiveplants;2:pCAMBIA3301vectorpositiveplants;3:Interferencevectorpositiveplants图2PCR-Southern检测注:CK+:阳性对照:N:阴性对照:1~9:阳性植株Figure2DetectionofPCR-southernNote:CK+:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~9:Positiveplants图3ZmSERK基因转基因植株中的相对表达量注:A:空白对照;B:干扰载体阳性植株;C:3301空载体阳性植株;D:过表达载体阳性植株Figure3TherelativeexpressionoftheZmSERKgeneintrans-genicplantNote:A:Blankcontrol;B:Interferencevectorofpositiveplants;C:pCAMBIA3301blankvectorofpositiveplants;D:Over-ex-pressionvectorofpositiveplants3504

?在不同条件下诱导，因而时间较长。而一直以来玉米遗传转化受体A188、Hi-Ⅱ、H99等，诱导形成的胚图1阳性植株Bar基因PCR检测注:M:DL2000marker;P:阳性对照(pCAMBIA3301质粒);W:阴性对照(水);1:过表达载体阳性植株;2:3301空载体阳性植株;3:干扰载体阳性植株Figure1PCRdetectionofbargeneinpositiveplantsNote:M:DL2000marker;P:Positivecontrol(TheplasmidofpCAMBIA3301-ZmSERK);W:Control(H2O);1:Over-expressionvectorpositiveplants;2:pCAMBIA3301vectorpositiveplants;3:Interferencevectorpositiveplants图2PCR-Southern检测注:CK+:阳性对照:N:阴性对照:1~9:阳性植株Figure2DetectionofPCR-southernNote:CK+:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~9:Positiveplants图3ZmSERK基因转基因植株中的相对表达量注:A:空白对照;B:干扰载体阳性植株;C:3301空载体阳性植株;D:过表达载体阳性植株Figure3TherelativeexpressionoftheZmSERKgeneintrans-genicplantNote:A:Blankcontrol;B:Interferencevectorofpositiveplants;C:pCAMBIA3301blankvectorofpositiveplants;D:Over-ex-pressionvectorofpositiveplants3504
【作者单位】： 吉林大学植物科学学院;
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX0800305B) 吉林省科技厅抗冷抗旱转基因玉米新种质创制与新组合培育(20160203005NY)共同资助
【分类号】：Q943.2;S513


本文编号：2538194