海南黑山羊IFITM3基因组织特异性表达和分布的研究

发布时间：2019-10-09 09:47

【摘要】：干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用。为深入研究山羊IFITM3在病毒感染中的分子作用机制,对获得的海南黑山羊IFITM3基因进行了序列分析并采用RT-qPCR方法进行了其组织特异性表达的检测,利用原核表达的IFITM3蛋白制备了多克隆抗体,并进行IFITM3在黑山羊组织中分布的研究。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由147个氨基酸组成,存在2个潜在跨膜区,不含信号肽。成功构建pET-32a(+)-IFITM3表达载体并表达了35 ku重组蛋白,免疫家兔后,经ELISA和Western-blot检测,获得的多克隆抗体特异性好。组织特异性表达的检测结果表明,IFITM3在心脏表达水平最高,大脑和胸腺表达量最低。IFITM3在心肌细胞、肝细胞、脾网状内皮细胞、肺支气管上皮细胞、肾小管上皮细胞、大脑皮质、胸腺髓质、肠系膜淋巴结皮质淋巴细胞、胃底腺细胞和肠腺细胞中均有分布。研究结果为深入探讨IFITM3在山羊疾病中的分子作用机制提供了基础数据。
【图文】：

海南,菌体,融合蛋白,质量标准

中国兽医科学第47卷图3pET-32a（＋）-IFITM3的诱导和纯化蛋白的SDS-PAGE及Western-blot分析Fig.3AnalysisoftherecombinantproteinbySDS-PAGEandWestern-blotM：蛋白质分子质量标准；1：诱导的pET-32a（＋）-IFITM3菌体；2：未诱导的pET-32a（＋）-IFITM3菌体；3：诱导的pET-32a（＋）空载菌体；4：未诱导的pET-32a（＋）空载菌体；5：纯化的融合蛋白；6：His标签抗体检测纯化的融合蛋白；7：血清检测融合蛋白M：ProteinmolecularweightMarker；1：LysateofpET-32a（＋）-IFITM3inducted；2：LysateofpET-32a（＋）-IFITM3withoutinducted；3：LysateofpET-32a（＋）inducted；4：LysateofpET-32a（＋）withoutinducted；5：Purifiedfusionprotein；6：Analysisofthepurifiedfusionproteinbyanti-Hisantibody；7：Analysisofthepurifiedfusionproteinbyanti-IFITM3serumantibody图1海南黑山羊IFITM3基因的克隆及pET-32a（＋）-I-FITM3质粒的鉴定Fig.1CloningofIFITM3geneofHainanblackgoatandi-dentificationofpET-32a（＋）-IFITM3M：DNA分子质量标准；1：IFITM3的RT-PCR产物；2：pET-32a（＋）-IFITM3的双酶切（EcoRⅠ和XhoⅠ）产物M：DL5000DNAMarker；1：RT-PCRproduct；2：ProductsfrompET-32a（＋）-IFITM3digestedwithEcoRⅠandXhoⅠ图2IFITM3基因系统发育树Fig.2PhylogenetictreebasedonIFITM3gene鱼和非洲爪蟾等七种物种的IFITM3基因序列进行的同源性分析表明，海南黑山羊IFITM3基因与牛的同源性最高，达95％；与斑马鱼的同源性最低，为48.5％。IFITM3基因的进化树分析表明，海南黑山羊IFITM3基因与牛的进化距离最近，与禽类、两栖类和鱼类相距较远（见图2）。运用ProtParam对海南黑山羊IFITM3蛋白分析表明，此基因编码147个氨?

海南,质粒,融合蛋白

3菌体；3：诱导的pET-32a（＋）空载菌体；4：未诱导的pET-32a（＋）空载菌体；5：纯化的融合蛋白；6：His标签抗体检测纯化的融合蛋白；7：血清检测融合蛋白M：ProteinmolecularweightMarker；1：LysateofpET-32a（＋）-IFITM3inducted；2：LysateofpET-32a（＋）-IFITM3withoutinducted；3：LysateofpET-32a（＋）inducted；4：LysateofpET-32a（＋）withoutinducted；5：Purifiedfusionprotein；6：Analysisofthepurifiedfusionproteinbyanti-Hisantibody；7：Analysisofthepurifiedfusionproteinbyanti-IFITM3serumantibody图1海南黑山羊IFITM3基因的克隆及pET-32a（＋）-I-FITM3质粒的鉴定Fig.1CloningofIFITM3geneofHainanblackgoatandi-dentificationofpET-32a（＋）-IFITM3M：DNA分子质量标准；1：IFITM3的RT-PCR产物；2：pET-32a（＋）-IFITM3的双酶切（EcoRⅠ和XhoⅠ）产物M：DL5000DNAMarker；1：RT-PCRproduct；2：ProductsfrompET-32a（＋）-IFITM3digestedwithEcoRⅠandXhoⅠ图2IFITM3基因系统发育树Fig.2PhylogenetictreebasedonIFITM3gene鱼和非洲爪蟾等七种物种的IFITM3基因序列进行的同源性分析表明，海南黑山羊IFITM3基因与牛的同源性最高，达95％；与斑马鱼的同源性最低，为48.5％。IFITM3基因的进化树分析表明，海南黑山羊IFITM3基因与牛的进化距离最近，与禽类、两栖类和鱼类相距较远（见图2）。运用ProtParam对海南黑山羊IFITM3蛋白分析表明，此基因编码147个氨基酸，蛋白质相对分子质量约为15ku，等电点为6.49；TMpred预测发现该蛋白有2个潜在跨膜区，分别位于58～80位氨基酸和106～125位氨基酸；ProtScale疏水性分析发现，其最小疏水指数为－2.111，位于第84位的丝氨酸，最大疏水指数为3.644，，位于第119位的
【作者单位】：华南农业大学兽医学院;
【基金】：广东省科技计划项目(2016A020210079)
【分类号】：S827

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