sipW基因突变对解淀粉芽孢杆菌PEBA20生物膜形成及抑菌活性的影响

发布时间：2019-10-23 19:18

【摘要】：sipW基因是芽孢杆菌属细菌的重要调控基因,表现出多种功能。本研究以植物内生生防细菌解淀粉芽孢杆菌PEBA20为材料,利用同源重组法构建了sipW基因缺失突变株,进而测定了该基因对PEBA20生物膜形成、抑菌活性和芽孢形成的影响。本文主要研究结果如下:1、将sipW同源前臂和同源后臂的连接产物sipWF-sipWB与自杀质粒PMUTin4经双酶切、T4连接酶连接得到重组自杀质粒sipWF-sipWB-PMUTin4。将重组质粒经电转化方法转化入B.amyloliquefaciens PEBA20感受态细胞中,采用红霉素筛选法筛选获得sipW基因缺失的PEBA20突变株;以缺失株DNA为模板进行PCR筛选阳性克隆,并通过测序确定获得sipW基因缺失突变株。2、观察了B.amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株的液气界面和固气界面生物膜形成过程,发现sipW基因缺失突变株固气界面生物膜结构复杂程度略显简单,液气界面生物膜也较野生株为简单,表明sipW基因调控了解淀粉芽孢杆菌生物膜形成过程。3、检测B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突变株对三种植物病原真菌和三种植物病原细菌的抑菌活性。结果显示,与野生株相比,sipW基因缺失突变株对三种指示真菌和三种指示细菌抑菌效果均下降,并且对其中某些真菌和细菌的抑菌作用差异显著水平较为显著。表明sipW基因的缺失突变影响了解淀粉芽孢杆菌对真菌和细菌的抑菌作用。4、对B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突变株的菌体芽孢形态检测结果显示,sipW基因缺失突变株能产生芽孢,且突变株的菌体与野生株相比差异不显著。表明sipW基因缺失突变株可能不影响芽孢的形成。
【图文】：

sipW基因的同源重组构建

EBA20 sipW 同源前臂 sipWF、同源后臂 sipWB 的 PCR 扩增产1. sipWF；2. sipWB；M. 核酸分子量标准(Marker 1) 2 PCR products of sipWF and sipWB from B. amyloliquefaciens P1.PCR products of sipWF; 2. PCR products of sipWB; M.transF 与同源后臂 sipWB 的单酶切及连接酶 XhoⅠ分别对回收的 sipWF 和 sipWB 片段切片段进行连接，获得 sipW 基因缺失片段 si预期目的条带大小相符，如图 3 所示。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S476

【参考文献】

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本文编号：2552223