【摘要】：研究目的本实验研究白细胞介素35(Interleukin 35,IL-35)基因修饰的间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的影响及其作用机制,探索出有效减轻移植术后排斥反应、诱导免疫耐受的新途径。研究方法1、利用Ⅰ型胶原酶消化法获取小鼠脂肪来源的间充质干细胞(adipose tissue-derived MSCs,ad-MSCs),应用流式细胞术(FCM)进行表型鉴定。2、体外以过表达IL-35慢病毒颗粒感染小鼠脂肪间充质干细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中IL-35表达情况,成功获得IL-35基因修饰的MSCs(IL-35-MSCs)。3、建立小鼠异位腹腔心脏移植模型,设置IL-35-MSCs实验组、MSCs处理组、生理盐水对照组、同系对照组。观察各组移植心脏存活时间,评估术后5天移植物急性排斥反应病理分级;蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)法检测移植心脏IL-17表达水平;ELISA法检测术后5天各组外周血IL-35浓度;采用流式细胞术检测术后5天各组小鼠体内T细胞亚群变化。研究结果1、小鼠脂肪来源的间充质干细胞成功获取,过表达IL-35慢病毒载体成功感染间充质干细胞,感染后细胞上清IL-35浓度达到265.8±16.650 pg/ml。2、成功构建小鼠异位腹腔心脏移植模型,与异系生理盐水对照组(6.17±0.753d)相比较:MSCs处理组(10.67±1.211d)及IL-35-MSCs实验组(14.5±1.049d)移植心脏平均存活时间明显延长(P0.01);术后5天移植物急性排斥反应病理分级较对照组明显降低(P0.01)。3、ELISA法结果显示IL-35-MSCs实验组小鼠体内IL-35稳定表达,浓度达60.71±5.38 pg/ml。4、与对照组相比,MSCs处理组及IL-35-MSCs实验组术后5天外周血和脾脏Th1/Th2、Th17比例均明显降低(P0.01),脾脏CD4+CD25+T细胞比例明显增高(P0.01)。5、Western Blot检测结果显示MSCs处理组及IL-35-MSCs实验组移植物IL-17蛋白表达水平较生理盐水对照组明显降低。研究结论1、过表达IL-35的慢病毒能够成功、高效率感染小鼠来源的ad-MSCs;在体内外实验中,IL-35-MSCs均能够持续、有效表达IL-35。2、小鼠异位腹腔心脏移植模型是研究器官移植排斥反应的理想动物模型。IL-35-MSCs对同种异系小鼠心脏移植有抗排斥作用,其机制可能为IL-35及MSCs产生免疫调控协同作用,刺激CD4+CD25+Treg的生成,诱导小鼠体内Th1/Th2平衡偏移、降低Th17细胞比例,延长心脏存活时间。IL-35-MSCs细胞免疫疗法可能成为有效诱导移植免疫耐受的新途径。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R654.2
【参考文献】
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2555772
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