家蝇CYP6G4基因的原核表达与功能鉴定

发布时间：2019-11-09 03:34

【摘要】：家蝇是重要的疾病媒介,其抗药性问题突出,其中细胞色素P450介导的代谢解毒作用增强是其抗药性的重要机制。本研究通过原核表达系统成功表达并获得有活性的CYP6G4及细胞色素P450还原酶(CPR),使用体外重组酶系检测家蝇CYP6G4对7种拟除虫菊酯和3种香豆素类植物次生物质的代谢活性,明确CYP6G4在代谢外源物质中的作用。目前主要取得如下成果：(1) CYP6G4蛋白和CPR蛋白在大肠中成功地得到表达,重组表达的CYP6G4和CPR分子质量分别为59×103和76×103Da,其中CYP6G4检测到明显的P450特征峰,表达量为0.37±0.02 nmol/mg蛋白；CPR表现出细胞色素C还原酶活性,表达量为0.47±0.05nmol/mg蛋白,两者的表达蛋白主要锚定在细胞膜上。(2)HPLC检测到CYP6G4对胺菊酯、香豆素、欧前胡素的代谢活性,其中胺菊酯代谢产物为羟基化胺菊酯。LC-MS检测了加入b5对体外重组酶系的作用,结果显示加入b5的实验组和不加b5的实验组的产物形成均符合米氏动力学特征,km分别为94.25±8.65μM和36.37±3.62μM,Vmax分别为686.8 peak area/min/pmol P450和536.5peak area/min/pmol P450,并且加入b5可以促进CYP6G4对胺菊酯的代谢。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q78

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本文编号：2558219